| 實驗步驟 | 1) 從不同生產廠商得到 100ml 的批次的試驗血清。
2) 用本實驗室常用的 2~3 種細胞來檢測血清。
3) 將 lml 含有 20% 的上述待檢血清的培養液加于 9 個培養皿中(35-mm), 每種批次的血清用 9 碟細胞培養皿進行檢測。
4)9 碟中每 3 碟接種入 500、1000、2000 個細胞。如果細胞存活率較高,細胞數可降低。細胞不必長滿,但應長到形成足夠密度的單個克隆。細胞應在不含血清的培養液屮稀釋,以免殘留血淸遺留在現有的培養液中。細胞應加至體積為 1 ml 以便血清終濃度為 10%。現用的血清作為該方案的內標。
5) 配制 80 ml 含待檢血清濃度為 10% 的培養液。用該培養液每周給細胞換液兩次,共兩周。克隆在此期間應較明顯。
6) 進行克隆染色,比較不同批次血清的克隆數。克隆的染色用 1xPBS 漂洗,瀝干 PBS 后,加人 2 ml 的 Wright 染液(Fisher Scientific),室濕染色 8 分鐘后,加人 2 ml 水, 室溫放置 10 分鐘后用水漂洗,觀察克隆的數量和大小。 展開 |
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