血清白蛋白溴甲酚綠法測定實驗

一、實驗試劑。

1、0．5mol／L琥珀酸緩沖貯存液（PH4．0）溶解Na0H  10g琥珀酸 56g于 800m1蒸餾水中，用1mol／L氫氧化鈉調至pH4.1＋0.05加水稀釋至1000ml此液置4℃冰箱保存．

2、BCG已存液（10mol／L）：溶解BCG（MW＝720.22）1.80g于5m1  Na0H中用蒸餾水稀釋至250ml．

3、疊氮鈉貯存液：溶解疊氮鈉40g于1000ml蒸餾水中。

4、聚氧化乙烯月桂醚（BYij－35）貯存液溶解2.5g聚氧化乙烯月桂醚于80ml蒸餾水中，加熱助溶然后加蒸餾水至10ml．

5、BCG試劑：與1L容量瓶中盛蒸餾水約400m1，加琥珀酸緩沖貯存100ml，用吸管準確加入BCG貯存液8．0m1，并用蒸餾水將吸管壁上殘留的少量染料沖洗到液體中加疊氮鈉25ml，聚氧化乙烯月桂醚25ml最后用蒸餾水稀釋到刻度，配好BCG試劑應為4.15土0.05。

6、40g／L白蛋白標準應用液

二、實驗操作：按下表進行

波長630nm。用空白管調零，用定量加液器加BCG應用液與血清標本混合后，立即在30土3S，讀取吸光度，如果標本混濁可做標本空白管（血清0．02m1加琥珀酸緩沖液40ml）以琥珀酸緩沖液調零測定標本空白管吸光度，測定管吸光度減去標本空白管吸光度后計算結果．

三、實驗操作：按下表進行


四、計算：

血清白蛋自（g／L）＝測定管吸光度／標準管吸光度×標準管白蛋白濃度（g/L）

同時測定血清標本的總蛋白濃度，減去血清白蛋白濃度，即得血清球蛋白濃度，并可計算血清白、球蛋白比值．

參考值：35－55g/L

1、實驗證明BCG不但與白蛋白顯色，而且與各種蛋白成分顯色其中以球蛋白、轉鐵蛋白、融珠蛋白更為顯著，其反應度較該蛋白稍慢，故有人主張用定值參考血清作標準比較理想，BCG與血清特異結合后，在此30秒讀取吸光度，可明顯減少非特異性結合反應.

2、當60g/L白蛋白標準與BCG結合后，溶液光徑1.0cm。，在630nm測定的吸光度0．811士0．035，。如達不到此值，表示靈敏度較差。

3、此法測定正常血清標本的批間異系數－6．3％左右．

4、試劑中的聚氯化乙烯月桂醚也可用其它表面活化劑代替，如吐溫－20等，用量為2ml／L。