1、原理
補體能使抗體致敏的羊紅細胞發生溶血反應，根據溶血程度可測定補體總活性。以溶血百分率作縱坐標，相應的血清量為橫坐標繪圖，可知在50%溶血附近補體的量與溶血程度呈直線關系。因此以50%溶血作為終點較以100%溶血作為終點更為敏感。故稱為50%溶血試驗，即
CH50（50%complementhemolysis）。
2、主要試劑
（1）綿羊紅細胞（sheepredbloodcell，SRBC）
自綿羊頸靜脈采血，注入裝有等量或二倍量阿氏（Alsever）液的無菌三角燒瓶中，輕搖3-5min，分裝，4℃保存，可用2-3周左右。試驗時，取一定量的SRBC用生理鹽水洗滌3次，最后1次洗滌離心的條件每次試驗要保持一致。試驗時一般配成1×109SRBC/ml。為使每次試驗時SRBC的濃度標準化，可根據經細胞計數器校準的濃度為1×109SRBC/ml的細胞懸液，用分光光度計測定其OD541nm值，以后每次試驗均參照此OD值校正
SRBC濃度；
（2）溶血素（hemolysin） 即抗SRBC抗體，是以SRBC作為抗原免疫家兔所得。有商品出售，可按標示效價計算單位和稀釋使用，也可自行制備和滴定；
（3）稀釋液
三乙醇胺（TEAE）緩沖液（儲存液）：TEAE 28ml，1mol/LHCl 180ml，NaCl75g，MgCl2·6H20 1g，CaC小2H20 0..2g，硫柳汞0.1g，或NaN3 0.5g，用蒸餾水溶至1000ml。放4℃冰箱保存備用；
應用液：取TEAE儲存液1份，加蒸餾水9份稀釋即成；
（4）致敏SRBC 取2個單位的溶血素與1X109SRBC/ml懸液等量混和，放37℃水浴30min。溫育過程中應經常搖動。致敏后用TEAE緩沖液洗滌3次后，制成5X10u/ml濃度的致敏SRBC懸液。
3、方法
先配制50%溶血標準管，在各試管中加入反應物，放37℃水浴60rain，以2000r/min離心10min；再與50%溶血標準管比較，觀察溶血程度。
取與50%溶血標準管相接近的二管在分光光度計上分別讀取OD541nm值，以最接近50%溶血標準管OD值的一管，按下列公式求得50%溶血的總補體活性值。血清總補體活性（CH50）=1/（血清用量×稀釋倍數）。本法測得血清總補體活性的正常值為30～40CH50U/ml。
上述補體總活性CH50測定方法由于每次試驗需使用新鮮SRBC，細胞與細胞的批間差異也常因動物的個體和采血時間而異，且又是一種半定量的人工操作試驗，迄今難以令人滿意。1995年日本學者Yamamoto等創建一種脂質體均相免疫溶破試驗，用于血清總補體活性測定。并由Wako公司研制成診斷試劑盒，包括兩種試劑：試劑1為脂質體，它是由一個極性部分（磷脂中的膽堿）和一個非極性部分（磷脂中的烷基）組成的封閉性顆粒。在脂質體的內部水相中包入水溶性的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6-PDH）；在其脂質體雙層內包裹抗原——二硝基苯酚（DNP）。試劑2為羊抗DNP抗體和酶底物——
24mmol/L 6·磷酸萄萄糖（G6P）和9mmol/LNAD（輔酶1）。
試驗方法分為兩步：（1）將10ml血清樣品與250pL脂質體（試劑1）混合，作用5min；（2）加入抗體和酶底物（試劑2）125ml，混勻。反應4.5～5min，用自動分光光度分析儀340nm波長測定酶反應物的吸光度。反應過程為試劑2中的抗DNP抗體與脂質體上的抗原（DNP）結合，形成抗原—抗體復合物，血清樣品中的補體被激活，攻擊并破壞脂質體的膜。脂質體膜溶破后釋放出的G-6-PDH與酶底物的G6P和NAD發生反應，產生的NADH在340nm測定其吸光度（A）。A值與血清樣品中補體活性成一定比例關系。該法與經典的CH50溶血法對比測定結果的相關系數為
r：0.87-0.923，且方法簡便，快速準確，血清用量少，適用于自動分析儀測定。