血清鐵以Fe3+形式與轉鐵蛋白(Tf)結合成復合物,降低介質pH及加入還原劑(如抗壞血酸、羥胺鹽酸鹽等)能將Fe3+還原為Fe2+,則轉鐵蛋白對鐵離子的親和力降低而解離,解離出的Fe2+與顯色劑(如菲咯嗪和2,2′-聯吡啶等)反應,生成有色絡合物,同時作標準對照,計算出血清鐵的含量。