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  • 發布時間:2019-04-13 12:17 原文鏈接: 血清LT谷氨酸轉肽酶(GGT)測定實驗

    實驗方法原理本法以L-T-谷氨酸α-萘胺為底物,在GGT催化下,T-谷氨酸基轉移到雙甘肽分于上,同時釋放出游離的α-萘胺,后者與重氮試劑反應,產生紅色化合物。
    實驗步驟

    一、 實驗試劑:

    1. 150mmol/L Tris,60mmol/L雙甘肽溶液:稱取Tris9.1g,雙甘肽3.96g,溶于400ml蒸餾水中,再加蒸餾水至500ml,加少氯仿防腐,置冰箱保存,此液PH約8.0(25℃)。

    2. 1mol/L HCL

    3. 底物緩沖浪(8mmol/L L-T-谷氨酸α-萘胺,54mmol/L雙甘肽):稱取L-T-谷氨酸α-萘胺(無結晶,MW272.3)217mg,置于小燒壞中,加人1mol/L鹽酸約4ml,使完全溶解,再加人上述Tris雙甘肽溶液90ml于25℃用lmoL/L鹽酸調至PH8.0±0.1,然后加水至10Oml(此液在37℃,PH為7.8-7.9),置冰箱保存。

    4. 2g/L對氨基苯磺酸醋酸溶液(含醋酸20%),置冰箱保存。

    5. 1g/L亞硝酸鈉水溶液,置冰箱保存。

    6. 顯色劑:lg/L亞硝酸鈉水溶液4ml,加2g/L對氨基苯磺酸溶液100ml,充分混勻,當天配用。

    二、 實驗操作:取 16mm×100mm試管,按表操作:

    以上各管混勻后放置10min,在波長530nm,比色杯光徑1.0cm,用對照管調零讀取測定吸光度,查標準曲線。

    標準曲線繪制:

    l. 1.5mmol/L α-萘胺標準液:精確稱取α-萘胺214.8mg,置1000ml燒杯中加5ml無水乙醇溶解,然后加蒸餾水6O0ml,立即充分混勻,定量移入100Oml容量瓶中,加蒸餾水至刻度,混勻,置棕色瓶中,冰箱保存。

    2. 0.15mmol/L α-萘胺標準液,以1.5mmol/Lα-萘胺標準液用底物緩沖液作1:10稀釋。

    按表進行操作:


    以上各管充分混合,放置10min,分光光度計波長530nm,比色杯光徑1cm,一對照管調零,讀取各個吸光度,以吸光度為縱軸,GGT(u/L)為橫軸,作圖,此即標準曲線。

    參考值:成年男性:3--17u/L

    成年女性:2--13u/L

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    注意事項

    1. 超過300單位要將血清稀釋后重做,結果乘以稀釋倍數。

    2. 每批標本可只做1-2管空白管,但黃疸及溶血標本一定單獨作空白管。


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