1. 實驗原理
應用瑞氏染色法對制備好的薄血片進行染色后在顯微鏡下查找瘧原蟲,并鑒別其形態種類。
2. 標本采集
2.1 標本采集前病人準備:間日瘧及三日瘧患者應在發作后數小時至10余小時采血;惡性瘧患者,應在發作后20h左右采血。
2.2 標本種類:全血或末梢血
2.3 標本要求:薄血片的血膜厚度要適度均勻以利鏡檢。
3. 標本儲存:室溫存貯,盡快檢查。
4. 標本運輸:室溫運輸。
5. 標本拒收標準:細菌污染。
6. 操作步驟
6.1 以常法推制成薄片。
6.2 血膜完全干燥后即可進行瑞氏染色。
6.3 在油鏡下進行檢查。
7. 結果判斷與分析(見附表):在油鏡下觀察,進行形態鑒別。
8. 臨床意義:本實驗用于對瘧原蟲的形態進行鑒別分類。
9. 操作性能:快速簡便、操作簡單。
10. 方法局限性
10.1 陽性檢出率較低。
10.2 存在主觀判斷的失誤。
11. 參考文獻
中國人民共和國衛生部醫政司編.全國臨床檢驗操作規程(第二版).1997,85-86
12. 注意事項
12.1 染色后,水洗時不要先倒去染液,應讓清水流進染液,使沉渣沖走。
12.2注意區別易與瘧原蟲混淆的其他雜物。
12.3 薄片油鏡檢查,須找出100或100個以上視野才能報告“未檢出瘧原蟲”。
12.4找到環狀體后,須再仔細尋找更為成熟的階段,以便分類。如確實未找到更為成熟階段的瘧原蟲,可報告為“檢出環狀體瘧原蟲”。
12.5 有可能出現2種或3種瘧原蟲混合感染時,以間日瘧與惡性瘧原蟲混合感染為常見,須注意鑒別。
附表:薄血片上3種瘧原蟲形態特點:
形態特點 | 間日瘧原蟲 | 三日瘧原蟲 | 惡性瘧原蟲 | |
( 環 狀 體) 早 期 滋 養 體 | 蟲體大小 | 較大, 約為紅細胞的1/3 | 較大, 約為紅細胞的1/3 | 較小, 約為紅細胞的1/6 |
細胞漿 | 淺藍色, 呈較薄之環狀 | 淺藍色, 呈較厚之環狀 | 淺藍色,環狀較細薄,常位于細胞之邊緣,有時1個細胞內有2個環狀體 | |
染色質 | 可長得很大,甚至充滿整個紅細胞 | 與間日瘧原蟲同 | 紅色小點,1個環狀體具有1-2個-或更多 | |
晚 期 滋 養 體 | 蟲體大小 | 可長得很大,甚至充滿整個紅細胞 | 較小 |
在末梢血液中查不到 |
細胞漿 | 呈阿米巴狀, 變化很多 | 呈堅實帶狀, 變化不多 | ||
瘧色素 | 棕黃色,呈微小短桿狀,四散分布 | 黃綠色,呈較粗顆粒狀,四散分布 | ||
斑點 | 薛氏小點,鮮紅細小,均勻分布 | 齊氏小點,紅色 | ||
裂 殖 體 | 蟲體大小 | 很大 | 較小 |
在末梢血液中查不到 |
細胞漿 | 松散,比較不規則 | 堅實較圓 | ||
裂殖子數目 | 12-24個,平均16個 | 6-12個 | ||
裂殖子形態 | 排列不規則 | 排列不規則或呈花朵狀 | ||
配 子 母 體 | 蟲體大小 | 圓形, 約為紅細胞1/2以上 | 圓形,與紅細胞等大或較小 | 半月形,兩端鈍圓(雄),兩端較尖(雌) |
細胞漿 | 深藍色 | 深藍色 | 藍色 | |
染色質 | 結實,深紅色, 位于一邊 | 結實,深紅色, 位于一邊 | 結實,深紅色, 位于中央 | |
瘧色素 | 沿邊分布 | 沿邊分布 | 黑褐色,密集于中央 | |
紅細胞 | 脹大,色較淡 | 正常或縮小 | 正常,偶然縮小,色深 |