1. 將鋁箔鋪在軟木板上。
2. 將主動脈（新鮮豬主動脈：如條件允許，需無菌取材。放入 HBSS/PSGA 中轉運）放于 70 % 乙醇浸泡的棉紙上面，然后輕拍動脈以吸干表面的液體。
3. 在鋁箔覆蓋的軟木板上，修剪主動脈周圍組織，只保留分支。不要將分支剪得過短。
4. 用線結扎分支，夾住主動脈細端。
5. 注入 D-PBSA，將主動脈充滿，然后夾住主動脈上端。
6. 用無菌鱷魚夾將漏液處夾閉。
7. 吸出 D-PBSA。
8. 用溫膠原蛋白酶（膠原蛋白酶H : 同 HUVEC 分離方法中的材料，50 ml）液充滿主動脈，然后夾閉動脈。用乙醇噴過的塑料薄膜包裹主動脈，在 37°C 條件下放置 8 min。
9. 輕輕按摩主動脈，使內皮細胞脫落。
10. 讓主動脈中的膠原蛋白酶液流人盛有 5 ml FBS 的 50 ml 試管。
11. 用冰冷的 D-PBSA 充滿主動脈，隨后夾閉動脈。按摩后讓 D-PBSA 流入步驟 10 中用的試管。然后，重復此步驟一次。
12. 在 4°C 條件下離心（500 g，6 min）。
13. 用 5 ml 培養液混懸細胞，將細胞懸液注入 25 cm2 培養瓶，在 37°C 條件下培養過夜。
14. 第二天吸去培養液。
15. 用 D-PBSA 洗細胞 2 次，然后加入培養液。
維持培養
16. 每周換培養液 3 次。如果細胞單層不足 50 % ，只換一半培養液。若細胞單層達 50 %~80 % ，換全部培養液。
17. 當細胞單層達 80 % 時，用胰蛋白酶和 EDTA 混合液消化，按 1 : 3 傳代。
18. 不要使用超過 7 代的細胞。 展開 | 