1)取一定量VWF∶Ag抗血清,用三羥甲基氨基甲烷-巴比妥緩沖液稀釋10倍,另取5g/L瓊脂糖三羥甲基氨基甲烷-巴比妥緩沖液隔水融化,冷卻至56℃。然后將預溫至56℃的稀釋VWF∶Ag抗血清1∶60混合(視抗體效價而定),制成8cm×8cm、厚1.5mm的瓊脂板,距玻板一邊約2cm處打一排小孔,徑孔3mm,孔間距為5mm。
(2)將瓊脂板置于電泳槽內,孔朝陰極,用濾紙作鹽橋,用定量注射器吸取原血漿1∶2、1∶4、1∶8、1∶16等不同倍數稀釋的健康人血漿各10μl,分別加入抗體瓊脂板小孔里。待檢血漿樣品用Tris-巴比妥緩沖稀釋1倍后,加入各樣品孔內。每孔加量均為10μl。
(3)電泳條件:電泳110~150V,電流約5mA/塊板,時間18h,溫度低于15℃。
(4)電泳完畢,取出凝膠板浸于4.4mmol/L磷鉬酸染色液中20min以上,然后再放入生理鹽水中浸泡10min,即可見明顯火箭狀沉淀峰,也可用氨基黑按常規方法染色。
(5)染色后,用雙分規測量火箭電泳峰的高度(從加樣孔上緣到峰頂),將標準血漿5個讀數,通過回歸方程得出標準曲線,然后求出各測定樣品VWF∶Ag的含量,再乘以稀釋倍數(×2),即樣品實際濃度。表示相當于正常血漿的百分率。