當稀釋血液中加入溶血劑后,紅細胞溶解并釋放出血紅蛋白,血紅蛋白與溶血劑中的某些成分結合形成一種血紅蛋白衍生物,在特定波長(530~550nm)下比色,吸光度變化與稀釋液中Hb含量成正比,最終顯示Hb濃度。如含氰化鉀的溶血劑,與血紅蛋白作用后形成氰化血紅蛋白,其最大吸收峰接近540nm。