血細胞自動分析與溶血劑臨檢基礎

血細胞自動分析與溶血劑：

自從Coulter血細胞計數儀問世之后，血細胞計數及其近年來的全自動分析得到迅速發展，許多廠家已研制并推出白細胞5分類的血細胞分析儀，而溶血劑的組合及其質量起著關健作用，現將有關問題綜述如下。

1.溶血劑與血細胞自動化分析

現代自動血細胞分析儀聯合運用了阻抗和射頻技術來進行5分類白細胞計數，白細胞檢測系統可分為淋巴、單核、粒細胞檢測系統，嗜酸粒細胞檢測系統，嗜堿粒細胞檢測系統，以及幼稚細胞檢測系統，各個白細胞檢測系統均需使用特異的溶血劑。

1.1淋巴、單核、粒細胞檢測系統，此系統所使用的溶血劑的溶血作用較輕，溶血劑中的表面活性劑穿透細胞膜，僅使少量的胞漿溢出，對細胞核的皺縮作和也較為輕微，細胞的形態改變不大，檢測系統采用了電阻抗和射頻技術來聯合檢測，檢測系統根據所產生的DC和RF信號的差異，通過掃描技術來得出細胞所占比例。

1.2嗜酸粒細胞檢測系統，此系統所使用的溶血劑能特異性的溶解嗜酸性細胞之外的細胞，含有完整嗜酸粒細胞的液體通過小孔時，計數電路產生脈沖計數。

1.3嗜堿粒細胞檢測系統原理和嗜酸粒細胞檢測系統相同，也要使用本系統專用的溶血劑。

1.4幼稚白細胞檢測系統幼稚白細胞膜上的脂質較成熟白細胞為少，本檢測系統所使用的溶血劑中含有能固化細胞膜和胞漿的硫化氨基酸，由于脂質的成分、含量及在細胞膜上的占位不同，結合在幼稚白細胞上的硫化氨基酸較成熟白細胞為多，使胞膜和漿都固化，對溶血劑中具有溶血作用的聚甲醛非離子表面活性劑具有抵抗作用，加入溶血劑后，成熟白細胞被溶解，而幼稚白細胞得以保存，溶血劑中所含有的陰離子表面活性劑使殘留的細胞影和成熟白細胞核收縮，進一步突出了幼稚白細胞與成熟白細胞核的對比程度。本系統采用RF/DC探測方法檢測幼稚白細胞，一般來說，細胞越原始，它的RF信號就越低，在IMI通道的散布曲線圖上，它們經常出現在下面的特定區域。

2.表面活性劑和溶血劑的關系

用血細胞自動分析儀測定白細胞，必須使用溶血劑溶解紅細胞以消除對白細胞計數的影響，在大多數情況下，使用的溶血劑都包含有表面活性劑成分。常使用的溶血劑Sulfolyser（用SDS-Hb法的溶血劑）中包含有表面活性劑十二磺基硫酸鈉。

表面活性劑的功能能溶解細胞膜的表面活性劑在血液分析中被用于白細胞計數和血紅蛋白分析，常用來溶解紅細胞的表面活性劑十二磺基硫酸鈉，可以和Hb形成穩定的SLS-Hb用作比色分析。十二磺基硫酸鈉，可以代替氰化物，其主要特點是無毒，有利于環境保護。盡管溶血劑中表面活性劑的主要功能是溶解紅細胞，然而離散功能也是另外的一個重要功能，紅細胞溶解后會形成影細胞（ghostcell），如影細胞聚集在一起，會干擾白細胞的測定，具有離散功能的表面活性劑可離散聚集在一起的影細胞，表面活性劑具有廣泛的特性和使用用途，從而可以選擇合適的表面活性劑來滿足預想中的用途。在陽離子表面活性劑中，季胺鹽提供了強大的抗菌效果，可用于試劑的防腐，有的表面活性劑還可穩定顆粒的大小，以防止內容物的降解，能降低表面張力的表面活性劑可添加在試劑中以防止氣泡的產生。

3.表面活性劑的組成及特性

表面活性劑包含有具有不同特征的兩個或多個功能區，以肥皂分子（一種典型的表面活性劑）為例，包含有長鏈的疏水碳氫化合物和高度親水的羥基，表面活性劑根據其主要新水基團的離子種類分為：陰離子型、陽離子型、兩性型和非離子型，隨著親水基團和疏水基團的不同，表面活性劑的特性具有很大的不同，它們具有廣泛的功能，包括：清潔、溶解、分散、乳化，催化及減少表面張力等。

4.表面活性劑溶解紅細胞膜的作用機制

4.1陽離子表面活性劑紅細胞表面帶有負電荷，陽離子表面活性劑通過靜電作用吸附于其表面，陽離子表面活性劑溶解磷脂的能力10倍于陰離子表面活性劑，然而具有長鏈的碳氫化合物的陰離子表面活性劑比陽離子表面活性劑的溶解效率更高，這提示除了磷脂的溶解外，還有其他機制介入細胞膜溶解。陽離子表面活性劑作用于磷脂，把它們和蛋白質分離開來，而導致細胞膜的溶解。

4.2陰離子表面活性劑陰離子表面活性劑不能通過靜電作用吸附于細胞膜表面，但具有長鏈疏水基團的表面活性劑可拮抗其和細胞膜之間的靜電排斥力而吸附于其表面，其作用機制可能是通過離子和疏水鍵作用吸附于膜蛋白上，當它改變了蛋白質的結構后，就導致了細胞膜的溶解。

4.3非離子表面活性劑一些非離子表面活性劑，以TritonX-100為代表，具有很強的溶解能力，非離子表面活性劑的吸附和溶解機理還不十分清楚。Sasaki等人報道了具有龐大親水基團的表面活性劑仍位于脂質層的一側，而有小親水基團的表面活性劑則能穿透過脂質層，他們還描述了當表面活性劑濃度加大時，有龐大親水基團的表面活性劑能與脂質膜上的磷脂形成膠質粒子，溶解了脂質，據此推理，非離子表面活性劑以相同機制溶解紅細胞膜。

5.IMI通道在臨床的新運用

盡管IMI通道在SE-9000中運用的原意是用來檢測幼稚白細胞，而美國LomaLinda大學和日本Osaka大學在1995年報道了此通道也可用來檢測干細胞。在醫學治療領域的新方法中，外周血干細胞移植（PBSCT）提供了一種有潛力代替骨髓移植的新方法，外周血干細胞移植通常需要0.5×105CFU-GM（粒細胞巨噬細胞-集落生成單位）/kg量，為了取得足量的干細胞，需要準確預測最佳干細胞收獲時間，最理想的方法是對干細胞定量，然而應用流式細胞技術和CFU-GM集落鑒定術需要相對較高的成本和很長的時間，而應用SE-9000和其他相類似儀器的IMI通道來監測IMI陽性細胞，就可以知道最佳外周血干細胞收獲時間，其特點是快速和價格低廉醫`學教育網搜集整理。

綜上所述，血細胞分析儀的發展日新月異，現代自動血細胞分析儀已使白細胞5分類自動計數和幼稚白細胞計數成為可能，這些功能的實施除依賴于儀器的電子和機械技術的革新外，新型溶血劑的應用也是其中的重要因素之一。如上所述，表面活性劑在溶血劑中起重要作用，表面活性劑作用于細胞膜的機制非常復雜，開發出一種能應用于臨床的試劑往往需要無數次的基礎研究。新型溶血劑的誕生往往帶來血液自動分析的革新，我們應給予溶血劑的發展以足夠的重視。