【原理】
補體介導的細胞毒試驗（complement dependent cytotoxicity test）的原理是特異性抗體與細胞膜上相應抗原結合后，在補體的參與下，可產生細胞膜損傷，細胞死亡；不帶相應抗原的細胞仍然存活。利用染料排斥實驗判定淋巴細胞死活狀態，活細胞不著色，具有折光性，大小也正常。死細胞著色，體積增大。下面以HLA-A、B、C抗原檢測為例。
【材料】
1.Terasaki塑料板（60孔或96孔）、Fisher離心管、Fisher離心機、水平式離心機、倒置顯微鏡、血細胞計數板、普通顯微鏡、毛吸滴管、大試管、中試管、橡皮乳頭、溫箱、火花真空檢測器。
2.肝素抗凝劑（1000U/0.5ml/管）、Hanks液（pH7.2）、McCoy培養基、淋巴細胞分離液（比重1.077）、50 g/L 伊紅 Y、34-40%中性甲醛、生理鹽水、凝血酶。
3.兔補體 20只以上兔的新鮮血清混合而成，分裝于滅菌青霉素小瓶內。在無HLA抗血清時應無淋巴細胞毒性；1；2稀釋應仍能使分型血清反應結果記分為8分（見本實驗結果判定）。不稀釋，-70℃儲存備用。用前半小時，取出室溫融化，使用后剩余液棄去，不得反復凍融。
4.淋巴細胞懸液
（1）取肝素抗凝外周血10~15ml，1800rpm 離心10~15min。
（2）取白細胞層（1.0~1.5ml）加至含1.5 ml Hanks液的中試管中。
（3）用毛吸滴管混勻，輕輕沿管壁加在盛有1.5 ml淋巴細胞分離液的離心管中，使之重疊于淋巴細胞分離液上，分層良好。
（4）2000 rpm 離心20min。
（5）吸取單個核細胞層細胞，加入Fisher離心管中，用Fisher離心機4000rpm 離心5min。
（6）棄上清，加Hanks液，1500rpm 離心10min，以去除血小板。
（7）棄上清（內有血小板），加Hanks液混勻，加一滴凝血酶。
（8）轉動Fisher離心管，促凝，至血小板凝塊產生（約2 min左右）。
（9）1500 rpm 離心10min，使血小板凝塊沉淀。
（10）取上層懸液轉至新Fisher管中，1500 rpm 離心10min。
（11）棄上清（去除凝血酶），加Hanks液重懸細胞，1500 rpm 離心15min，棄上清，重復此步驟1次。
（12）棄上清，用McCoy液懸起細胞，并調整細胞濃度至1.5~2′106/ml。
（13）如細胞懸液中還含有紅細胞，可加抗A、抗B、抗H處理，去除。
5.HLA血清板
（1）取干凈Terasaki塑料板，各孔中加入一定量石蠟油。
（2）用干凈微量注射器加1ml各種已知的對照血清和特異性抗血清于相應各孔中。
（3）置-70℃或-80℃冰箱中保存備用（保存期為6~12個月）。
6.對照血清 陰性對照最好選用健康男性無輸血史的AB型血清，56℃30min滅活，或選用56℃30min滅活的健康人混合血清。陽性對照采用馬抗人淋巴細胞。
7.特異性抗體 采用經產婦血清、多次受血者的血清、計劃免疫志愿者的血清、腎移植排斥者的血清或單克隆抗體。
【方法】
1.自-80℃冰箱中取出HLA血清板，在室溫下融化。
2.標記血清板，標明待檢細胞號碼。
3.將待檢的T淋巴細胞或總的外周淋巴細胞充分混合（1.5′106~2′106/ml）。
4.用軟滴法加1ml細胞懸液于各孔中，并使之與血清充分混合（用火花真空檢測器混勻），室溫（25℃）下30min。
5.每孔加兔補體5ml，室溫（25℃）下培養60min。
6.每孔加5ml伊紅染液，2 min后，加中性福爾馬林5ml于各孔中。
7.將50′75mm2玻片放在血清板上使各孔液滴扁平。置倒置顯微鏡下檢查細胞存活百分率。
【結果】
結果記錄以“6”或“8”為確切陽性反應。細胞死亡則被染料著色，細胞呈灰暗色，體積增大，說明細胞表面有與特異的HLA抗體相對應的抗原；如果淋巴細胞表面沒有與特異的HLA抗體對應的抗原，則細胞不著色（著色細胞數<10%~19%）。或細胞具有折光性，大小正常。