實驗概要
用神經氨酸酶和羧肽酶B處理EDTA抗凝血漿，神經氨酸酶的作用主要是去涎，羧肽酶B能切除以分子p鏈C端的堿性氨基酸，去除副帶，將經過兩酶處理后的EIJE4抗凝血漿進行高壓電泳，然后與抗C4血清作用形成沉淀帶，將其漂洗后用考馬斯亮藍染色，參照第六屆國際補體定型會議C4定型標準或C4標準血清，判斷以的同種異型。
主要試劑
1. 羧肽酶B(carboxypeptidasetype I，Sigma)10mg/mL(170U/mg)。將羧肽酶B分裝于若干支EP管中，每管15uL，-20℃保存，用時取出一管加l00mmol/LNaCl至80gL(可供17份樣本用)。
2. 神經氨酸酶(neuraminidasetypeⅥ)IOU。將250rtl 0．2mol/L EDTA加入盛有神經氨酸酶的瓶中，-20℃保存。7.5ul EDTA抗凝血漿加2ul神經氨酸酶。
3. 抗C4血清,用時1：4或1：2稀釋。
4. 透析緩沖液(pH6．8)：NaH2PO4 84．80g，Na2HPO4 66．20g，Na4-EDTA 25．00g，加蒸餾水至2L，透析時用蒸餾水1：5稀釋。
5. EDTA緩沖液(pH7．2)：Na2-EDTA(MW 336．20)33．62g，Na4-EDTA(MW 380．20)38．20g，加蒸餾水至1L。
6. 電極緩沖液(pH8．8)：三羥甲基氨基甲烷(Tris)90．40g、甘氨酸112．40g、巴比妥27．40g、NaOH 2．92g加蒸餾水至4L。
7. 脫色液：甲醇900mL、冰醋酸200mL、蒸餾水900mL。
8. 染色液：考馬斯亮藍3．02，加脫色液至1L。
9. 0．75％瓊脂糖：稱取0．75g瓊脂糖(1CN或SEAKEM．M．E)，加3mL0．2mol/L EDTA，38mL電極緩沖液，加蒸餾水至100mL，加熱熔化。
實驗步驟
1. 將透析液約幾倒人一有蓋方盤內，方盤上放一玻璃板，玻璃板上鋪4層紗布，將透析膜貼在紗布上，不應有氣泡。取7．5ul EDTA抗凝血漿與2ul神經氨酸酶、3ul羧肽酶B在透析膜上混合，然后利用虹吸法4℃透析過夜。
2. 將0．75％瓊脂糖隔水煮沸或在微波爐中加熱至瓊脂糖溶液完全透明為止，立即傾注于125X260X 3mm玻璃板上，待其冷卻。
3.
在凝膠板離陰極0．5cm處鋪上2cm寬的4層濾紙，待濾紙完全浸濕后，輕輕揭掉；貼上塑料加樣板，每孔加透析完畢的樣本10uL，留二孔分別加血紅蛋白和C4分型標準品，靜置30min，待樣本完全浸入瓊脂糖凝膠中，揭掉加樣板。將加樣完畢的凝膠板放在冷卻循環電泳槽上，樣本放在陰極，打開冷卻循環泵(10℃)，接通電源控制電流在65～80mA，電泳45rain或待血紅蛋白遷移到離加樣孔6～7cm處，停止電泳。
4.
將抗C4血清1：2或1：4稀釋，均勻鋪在電泳完畢的瓊脂糖凝膠上，37℃30～45min，然后放人生理鹽水中漂洗過夜，次日換一次生理鹽水。漂洗后，用一層濾紙鋪在凝膠板上，上面放2打皺紋紙用重物壓住，待凝膠中水分吸干后放37℃烘干，然后放人0．3％考馬斯亮藍染色液中染色15min，再放人脫色液中脫色，直至背景清晰為上。
5. 依照第六屆國際補體定型會議分型標準或將待測樣本與C4分型標準血清比較，判斷待測樣本的同種異型。
6.
C4缺乏的判斷：染色完畢的凝膠板，在激光掃描儀上進行條帶密度掃描，以C4A及C4B條帶密度掃描結果求取A／B比值，比值等于1g寸表示C4A、C4B可能不存在零基因，比值大于1時表示C4B可能存在一個零基因，比值小于1B寸表示C4A可能存在一個零基因。