關鍵一：
血清標本可按慣例辦法采集，應留心防止溶血，紅細胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活 性的物質，以HRP為符號的ELISA 測定中，溶血標本或許會添加非特異性顯色。ELISA的操作因 固相載體的構成不同而有所差異，國內醫學檢修一般均用板式點。
關鍵二：標本的采納和保存
可用作ELISA測定的標本非常廣泛，體液、分泌物和排泄物等均可作標本以測定其間某種抗 體或抗原成份。重復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作屢次檢測，宜少數分裝冰存。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存 。如在冰箱中保存過久，其間的可發作聚合，在間接法ELISA 中可使本底加深。保存血清自采 集時就應留心無菌操作，也可參加適當防腐劑。除特別情況外，在醫學檢修中均以血清作為檢 測標本。本文將敘說板式ELISA各個操作過程的留心關鍵，珠式、管式及磁性球ELISA，試劑盒均與特別儀器配合使用，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照劃定操作，必能得出正確的成果。
關鍵三：
好的試劑，杰出的儀器和準確的操作是確保ELISA試劑盒成果正確牢靠的必要條件。 血清標本宜在新鮮時檢測。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同便是血清。 如有細菌污染，菌體中或許含有內源性HRP ，也會發生假陽性反應。有些標本可直接進行測定 ，有些則需經預處理。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清天然凝結、血塊縮短后即可取得。大部分ELISA試劑盒均以血清為標本。在ELISA中血漿和血清可相等使用。凍住血清融解后，蛋白質部分濃縮，散布不均，應充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上激烈振動。混濁或有沉積的血清標本應先離心或過濾，弄清后再檢測。