表達譜芯片的介紹與應用

相關背景資料main

基因表達譜芯片的原理a1

簡單地說就是在一塊有多聚賴氨酸包被的硅片上或其它固相支持物（如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜等，但需經特殊處理：作原位合成的支持物在聚合反應前要先使其表面衍生出羥基或氨基——視所要固定的分子為核酸或寡肽而定，并與保護基建立共價連接；作點樣用的支持物為使其表面帶上正電荷以吸附帶負電荷的探針分子，通常需包被以氨基硅烷或多聚賴氨酸等）將生物分子探針（Oligo或cDNA）以大規模陣列的形式排布，形成可與帶有標記的目的分子（如熒光染料Cy3、Cy5標記的cDNA）相互作用、交行反應的固相表面，在激光的順序激發下標記熒光根據實際反應情況分別呈現不同的熒光發射譜征，電壓耦合元件相機或激光共聚焦顯微鏡根據其波長及波幅特征收集信號，作出比較和檢測，從而迅速得出所要的信息。

雙色熒光標記a2
cDNA基因表達譜分析常使用的雙色熒光標記是利用競爭性雜交的原理，將對照組及測試組樣品的總RNA或mRNA 分別以不同的兩種熒光染料（如Cy5和Cy3）進行逆轉錄標記，然后將標記產物等量混勻，與固定在玻片上的探針cDNA分子進行競爭性雜交。檢測并計算兩種熒光強度的比值，可以得出兩組樣品間的基因表達差異。