細胞準備
1. 不同的細胞成瘤能力不同,在選擇時應根據實驗目的和具體情況綜合考慮。如乳腺癌細胞系MCF-7雖然經常用于體外實驗,但成瘤慮差,生長慢,因此一般不考慮。
2. 一般分為鼠源的和人源的細胞系,鼠源的一般更容易成瘤,但人源的更貼近人類腫瘤生長情況。
3. 取凍存于液氮的腫瘤細胞復蘇并擴增,確保腫瘤細胞的活力和較好的生長狀態。一般鼠源腫瘤細胞接種2-100萬/只,人源的細胞系需要200-1000萬/只以上。可結合細胞和裸鼠的實際情況,最高可以注射1000萬/0.1ml,不可再高,因為細胞幾乎達到飽和狀態。
注意計算好細胞用量,一般要多準備5只裸鼠左右細胞用量。
裸鼠準備
一般選擇5-6w齡的裸鼠,太小死亡率太高,太大免疫力會增強,不易成瘤。如無特殊要求雌雄均可。
接種步驟
1. 胰酶消化細胞,計數后將其重懸于生理鹽水中
2. 選擇進針部位(一般選擇腋下或腹股溝等血管豐富的部位),用酒精棉球擦拭進針部位
3. 向前方穿行,注射前針頭左右動一下,若無阻力則證明在皮下,否則可能在皮內或肌肉里面
4. 緩慢推注,一般體積為100-150μL,注射完后緩慢拔出針頭,可在注射部位看到明顯的鼓包
5. 接種點離進針點盡量遠一些,防止漏液和污染
結果處理
一般接種5天后即可看到腫瘤出現,根據實驗要去的生長天數,達到時間后頸椎脫臼處死裸鼠,取出腫瘤,拍照。拍照時需要放置兩把直尺,可用于后期計算腫瘤體積。