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  • 發布時間:2021-06-30 10:40 原文鏈接: 裸鼠皮下荷瘤的實驗步驟

    細胞準備

    1.     不同的細胞成瘤能力不同,在選擇時應根據實驗目的和具體情況綜合考慮。如乳腺癌細胞系MCF-7雖然經常用于體外實驗,但成瘤慮差,生長慢,因此一般不考慮。

    2.     一般分為鼠源的和人源的細胞系,鼠源的一般更容易成瘤,但人源的更貼近人類腫瘤生長情況。

    3.     取凍存于液氮的腫瘤細胞復蘇并擴增,確保腫瘤細胞的活力和較好的生長狀態。一般鼠源腫瘤細胞接種2-100萬/只,人源的細胞系需要200-1000萬/只以上。可結合細胞和裸鼠的實際情況,最高可以注射1000萬/0.1ml,不可再高,因為細胞幾乎達到飽和狀態。

    注意計算好細胞用量,一般要多準備5只裸鼠左右細胞用量。

    裸鼠準備

    一般選擇5-6w齡的裸鼠,太小死亡率太高,太大免疫力會增強,不易成瘤。如無特殊要求雌雄均可。

    接種步驟

    1.     胰酶消化細胞,計數后將其重懸于生理鹽水中

    2.     選擇進針部位(一般選擇腋下或腹股溝等血管豐富的部位),用酒精棉球擦拭進針部位

    3.     向前方穿行,注射前針頭左右動一下,若無阻力則證明在皮下,否則可能在皮內或肌肉里面

    4.     緩慢推注,一般體積為100-150μL,注射完后緩慢拔出針頭,可在注射部位看到明顯的鼓包

    5.     接種點離進針點盡量遠一些,防止漏液和污染

    結果處理

    一般接種5天后即可看到腫瘤出現,根據實驗要去的生長天數,達到時間后頸椎脫臼處死裸鼠,取出腫瘤,拍照。拍照時需要放置兩把直尺,可用于后期計算腫瘤體積。


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