最近，朋友圈里面的流式相關行業朋友都在轉一條關于《流式細胞術分析外周血淋巴細胞亞群在兒科的臨床應用共識》，對于流式檢測來說，這確實是個值得高興的事情。淋巴細胞亞群在流式應用中，屬于最早實現標準化的應用，不管是有證試劑還是現在的應用共識，因為簡單、細胞單純、分群清楚，所以從這個應用著手開始將流式推到公眾面前，是一個好機會。不過，我們也得認識到，在實際應用中，還是有不少影響標準化檢測的因素，例如儀器的穩定性、標本保存的穩定性等等，并且，臨床上，兒科可以與免疫缺陷進行關聯，但在成人，很難解讀。所以只能說，這個共識的出現，還暫時只能說：“革命尚未成功，同志尚需努力”。
其它流式應用也需要進行類似的規范化和標準化，需要大家一起努力，流式，任重道遠。
順祝FLOWER們端午安康。
《流式細胞術分析外周血淋巴細胞亞群在兒科的臨床應用共識》全文
使用流式細胞術(flow cytometry，FCM)進行淋巴細胞亞群分析已廣泛應用于臨床，在免疫功能評估上起到不可或缺的作用。由于FCM淋巴細胞亞群分析涉及多個參數，且各參數間關系復雜，如何有效解讀、判斷分析結果，并指導臨床疾病診斷、治療，目前還缺乏統一的指導原則。為了科學、合理地將FCM淋巴細胞亞群分析應用于臨床疾病的診斷、療效監測、預后評估等環節，中國醫師協會兒科醫師分會風濕免疫專委會、中國醫師協會兒科醫師分會過敏專委會及中華醫學會兒科分會免疫學組共同制定FCM分析淋巴細胞亞群臨床應用建議。
一、淋巴細胞亞群分析常規檢測項目和報告內容
FCM是一種對單細胞或生物顆粒進行多參數、定量分析的技術，具有速度快、精度高、準確性好等優點。目前FCM廣泛應用于基礎醫學與臨床學科，在疾病的診斷、分型、治療、預后及預防起到重要作用，其中淋巴細胞亞群分析是臨床開展最多的檢測項目。FCM淋巴細胞亞群分析指借助各種熒光染料標記的單克隆抗體測定各類淋巴細胞胞膜或胞內獨特的分化抗原(cluster of differentiation，CD)，對淋巴細胞的各個亞群進行分析。
常規檢測的淋巴細胞亞群包括T細胞(CD3＋)、B細胞(CD3-CD19＋)和NK細胞(CD3-CD16＋CD56＋)；T細胞又分為兩個亞群：輔助性T細胞(CD3＋CD4＋)和殺傷性T細胞(CD3＋CD8＋)。FCM淋巴細胞亞群分析報告提供各個細胞亞群細胞的相對計數(百分比)和絕對計數。
衛生部發布的FCM檢測外周血淋巴細胞亞群指南(WS/T 360-2011)[1]對于規范FCM在外周血淋巴細胞亞群分析具有重要指導意義。檢測過程需注意標本采集和運輸、免疫熒光染色、FCM檢測和分析、結果報告和審核等方面。
FCM可以直接測得各淋巴細胞亞群的相對計數。采用定量微球，用流式細胞儀單平臺方法可以直接獲得淋巴細胞亞群絕對計數。如果不用定量微球，可以采用FCM測定的淋巴細胞百分比，結合全血細胞分析儀測定的白細胞數量計算得到淋巴細胞的絕對計數。建議采用單平臺方法進行絕對計數檢測，它減輕了室間變異并避免了多臺儀器間的系統誤差。
二、標本采集和運輸
FCM檢測淋巴細胞亞群采用外周血標本。首選乙二胺四乙酸鹽(EDTA-K2/EDTA-K3)抗凝管采集淋巴細胞亞群標本，肝素鈉或檸檬酸鈉抗凝血也可用于檢測，但如標本同時進行白細胞計數分類，則應選擇EDTA作為抗凝劑。
連續檢測的同一患者應固定標本采集時間，標本采集后可立即檢測，不能立即檢測的標本應置室溫保存[2]，并在24 h內檢測。
三、檢測對象選擇
原則上免疫功能受損者均應常規評估淋巴細胞亞群。
(一)免疫防御功能受損者
易發生感染，這種感染的特點是反復、嚴重、多種病原體或特殊病原體的感染，以及常規治療效果不佳的感染。
1．反復感染：感染次數和頻率過高，超出正常人群，因感染的部位不同，具體反復的次數或頻率難以給出參考標準[3]。
2．嚴重感染：嚴重感染包括必須進行住院靜脈使用抗感染藥物的患者，以及需進行重癥監護和搶救的感染患者[4]。
3．多種病原體與特殊病原體感染：包括細菌、真菌和(或)病毒等多種病原體感染者；低毒病原如卡介苗、脊髓灰質炎疫苗株等的感染，對于新發現的病原體種類或病原體不清楚的感染病例尤其應該進行淋巴細胞亞群的檢測[5]，有助于對疾病狀況的評估。
4．常規治療效果不佳的感染：明確病原體種類，按照常規或指南治療，除了耐藥等原因之外還可能存在宿主免疫防御的受損，應考慮及時進行淋巴細胞亞群的檢測。
5．除了宿主免疫防御受損容易造成上述少見感染狀況之外，感染本身也可造成繼發性免疫防御受損，因此免疫評估應注意原發和繼發性兩方面的問題。
(二)免疫自穩和耐受功能受損者
此類患兒易發生自身免疫或自身免疫樣疾病及過敏或過敏樣的疾病表現。
1．過敏性疾病：
過敏性疾病是常見多發疾病，并非所有這類患者都需要進行淋巴細胞亞群的檢測。對于一些嚴重的過敏患者應考慮淋巴細胞亞群的檢測。
(1)嬰幼兒時期全身嚴重濕疹樣表現[6]。
(2)嗜酸性粒細胞顯著增多[7]。
(3)血清IgE水平明顯增高(IgE>1 000 IU/L)[8]。
(4)伴有反復、嚴重感染的患者。
2.自身免疫和自身炎癥性疾病：
自身免疫性疾病患兒檢測淋巴細胞亞群有助于對疾病的免疫狀況及藥物治療影響的評估，以初步了解淋巴細胞各個亞群可能存在的原發性或繼發性異常。
(1)存在難以控制的自身免疫反應情況及出現明顯的自身免疫性淋巴增殖情況[9,10]。
(2)合并反復感染的患者。
(3)存在自身炎癥反應。
(4)長期免疫抑制藥物、生物制劑使用前后[11]。
(三)免疫監視功能受損者
免疫監視功能受損，主要引起機體發生腫瘤性改變。
1．血液系統腫瘤：
兒童時期最為多見的是血液系統腫瘤[12]，這種情況應常規進行淋巴細胞亞群的評估。
2．其他腫瘤及實體瘤：
其他系統腫瘤患者也應酌情進行淋巴細胞亞群的檢測，既可能存在原發性淋巴細胞亞群的異常，也可能出現繼發性改變，尤其是進行各種化療時，淋巴細胞亞群大多會受到影響[13]。
(四)其他特殊情況
1．血常規中淋巴細胞明顯異常[14]。
2．家族成員中有免疫缺陷病史。
3．長期使用免疫抑制劑者。