羅托綜合征主要依賴輔助檢查明確診斷，有以下情況可以考慮本征的診斷。
1、血清學檢查
血清總膽紅素在68.4～119.7μmol／L之間波動，70%～80%為結合膽紅素。若肝細胞攝取非結合膽紅素障礙，以非結合膽紅素占優勢。
2、磺溴酞鈉試驗
羅托綜合征的特征性改變為注射磺溴酞鈉45分鐘后的平均潴留值為46%±8%，有時可達98%，但無第2次高峰現象。
3、吲哚氰綠排泄試驗
顯示吲哚氰綠潴留明顯增加。
4、尿糞卟啉
尿糞卟啉總量＞610mmol/24h，而先天性非溶血性高結合膽紅素血癥I和Ⅲ型異構體分布正常。
5、其他
尿膽紅素陽性；肝功能無異常；膽囊造影多數正常；肝穿刺活檢顯示肝組織結構正常，細胞內無色素顆粒。