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  • 發布時間:2022-07-18 12:52 原文鏈接: 谷胱苷肽的DTNB比色法介紹

      DTNB比色法

      原理:DTNB與谷胱甘肽的巰基反應生成黃色的5  -硫代  -2  -硝基苯甲酸,在412 nm波長處有最大吸收峰,而DTNB在400nm以上幾乎沒有吸收峰。向含有谷胱甘肽的試樣中加入少量的DTNB,將反應液在412 nm處測定吸收值,根據吸收值的大小即可求得谷胱甘肽含量。

      方法步驟:

      1、DTNB貯存液配制:將0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05 mol/L的磷酸緩沖液(pH7.0)中形成DTNB貯存液。

      2、DTNB分析液配制:將DTNB貯存液用0.5 mol/L、pH8.0的Tris  -HCl緩沖液稀釋100倍,配成DTNB分析液,避光放置,現配現用。

      3、操作步驟:取谷胱甘肽標準品溶液或待測樣品溶液(0.1 ~ 3.0 mol/L)0.5 mL,加入到1.5 mL濃度為0.15 mol/L的NaOH溶液中,再加入3%的甲醛溶液05mL,在pH8.0、25℃下反應2 min,反應結束后,取反應液0.5 mL加入DTNB分析液,在25℃下反應5 min,于波長412 nm下測定吸收值。根據兩者的吸光度,計算差值,代入標準曲線,計算出谷胱甘肽的含量。

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