質粒的酵母直接轉化

單菌落

PLATE溶液載體DNA轉化質粒DNA

離心管離心機

1、 用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑2～3mm），轉移到1.5ml的無菌離心管中。

2、 將10μl載體DNA（100μg）與10μl轉化質粒DNA混合，振蕩均勻。（若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“mini－prep DNA”方法制得，則不需加載體DNA）。

3、 加0.5ml PLATE溶液，振蕩。

4、 置于實驗臺上，室溫培養4天。

5、 置42℃下熱激15分鐘。

6、 以8000～10000r/min離心10秒沉淀細胞，小心棄去上清液，將細胞輕輕懸浮到200μl無菌蒸餾水，使細胞懸浮均勻，再直接將混合液涂選擇平板。

嚴格按照順序加入試劑

在酵母菌、脈孢菌和植物細胞中轉化的主要障礙是細胞壁。把細胞壁用酶消化后便能有效地轉化。