實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制備也簡單易行，但得到的DNA比較粗制。高純度的質粒DNA可通過氯化銫/溴化乙錠平衡離心法或層析法進一步純化粗制DNA得到。
實驗材料 培養基菌株
試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇乙酸鉀異丙醇
儀器、耗材 離心管
實驗步驟
1. 往5 ml的含選擇性試劑（通常是氨芐青霉素）的LB培養基或豐富培養基接種單菌落。于37°C劇烈振蕩培養過夜。
2. 往2 L燒瓶中加入500 ml含有適當抗生素的LB培養基，然后加人1 ml過夜培養的大腸桿菌培養物，再于37°C培養至飽和狀態（OD600≈4）。
3. 于 4°C，6000 g 離心 10 min。
4. 用4 ml GTE溶液重懸沉淀，并轉移到一個容積≥20 ml的高速離心管中。
5. 加入1 ml新配的含25 mg/ml溶菌酶的GTE溶液（終濃度5 mg/ml），徹底重懸沉淀，于室溫放置10 min。
6. 加人10 ml新配的NaOH/SDS溶液，并且輕輕混勻直至液體變得均一、清亮而黏稠。于冰上放置10 min。
7. 加人7.5 ml 3 mol/L乙酸鉀溶液，用吸管輕輕攪拌直至黏稠度下降并形成大的沉淀，于冰上放置10 min。
8. 于4 °C，20000 g離心10 min，將上清輕輕倒人至另一個干凈的離心管中，如果有可見的漂浮物可用數層紗布過濾。
9. 加人0.6倍體積的異丙醇，顛倒混勻，室溫放置5~10 min。
10. 室溫，15000 g離心10 min。棄上清，加人2 ml 70%乙醇輕輕洗滌沉淀。
11. 室溫，15000 g短暫快速離心，吸去乙醇，并真空干燥。4 °C無限期保存。
注意事項
1. 為提髙產量，應采用表面積較大及帶折流板的燒瓶以盡量增大通氣度；振搖速度大于400 r/min。
2. 如果DNA要用層析法純化，加人50 μg/ml RNA酶A以降解RNA。