1. 接種一個單菌落于5 ml LB培養液，37°C溫和振搖培養5 h或過夜。
2. 將2.5 ml培養物加入到盛有500 ml LB培養液的2 L燒瓶中，37°C，振搖（300 r/min）培養至OD600為0.5~0.6。
3. 細菌在冰水浴冷卻10~15 min，然后轉移到預冷的1 L離心瓶中。
4. 于2°C，5000 g離心20 min，棄上清，沉淀用5 ml預冷的水溶解。
5. 加入500 ml冰冷的水，混勻，按步驟3重復離心1次。
6. 立即將上清倒掉，用殘余的液體重懸細胞。重復步驟5。
7. 立即將上清倒掉，用殘余的液體重懸細胞。
8. （1）對于立即使用
將懸浮液加入到預冷的50 ml聚丙烯管中，2°C 5000 g離心10 min。置冰上，估計細胞沉淀的體積（約500 μl/500 ml培養液），沉淀用等體積的冰冷水重懸，并按50~300 μl分裝于預冷的微量離心管中。
新鮮制備的細菌其轉化效率要高于凍存的細菌。細胞密度大約2X1011 細胞/ml。
（2）凍存細菌
加入40 ml冰冷的10% （V/V）甘油，混合，然后按照步驟（1）離心， 估計沉淀的體積，然后加入等體積的冰冷的10%甘油，重懸菌體。按50~300 μl分裝于預冷的微量離心管中。于干冰上冷凍并儲存于-80 °C。
9. 為檢測感受態的效果，按照以下各步驟將PBR322轉化到感受態細菌。將合適體積的轉化物（1、10和25 μl)涂于含有氨芐青霉素的LB平板上，37°C培養過夜。
計算轉化率
每微克DNA=每滴液體體積（μl）含有的克隆數X105。
新鮮生長的細胞，一般都有>109 克隆數/μgDNA。
有2.5X1010~14X1010 轉化子/μg。
10. 將電轉化儀調到2.5 kV、25 μF，脈沖控制器調到200~400Ω。
11. 將1 μl質粒DNA （5 pg~0.5 ng）加入到盛有新鮮制備的細菌或融化的凍存細菌的小管中，混勻。
增大DNA體積和高濃度的鹽離子（應小于1 mmol/L）會降低轉化效率。
12. 將轉化混合物轉移到已放置冰上5 min預冷的電轉化池中，用Kimwpie吸水紙吸干 電轉池的外表面，然后放人電轉儀中，按操作進行脈沖電轉化。
13. 取出電轉化池，馬上把細胞轉移至一個含1 ml預熱的SOC培養液的無菌培養管 中。于37°C，中速振蕩培養30~60 min。
14. 分小份涂布于含有抗生素的LB平板上，選擇和保存轉化子。 收起 | 