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  • 發布時間:2019-03-26 14:33 原文鏈接: 質粒DNA的小量制備實驗——堿裂解小量制備法

    實驗采用國產的質粒小量抽提試劑盒。它是一種新型的離子交換柱,在特定的條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能將質粒充分洗脫,從而實現質粒的快速純化。


    實驗材料

    DNA

    試劑、試劑盒

    葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS乙酸甲乙醇

    儀器、耗材

    離心機漩渦混合器分光光度計

    實驗步驟

    1.  接種一個單菌落于5 ml 無菌LB培養液中,在37℃培養至飽和狀態(OD600≈4)。

     

    2.  取1.5 ml 培蕎液離心20 s 沉淀用100 ul 溶液重懸并于室溫靜置5 min。


    3.  加入200 ul NsOH/SDS溶液,混勻。于冰上放置5 min。

     

    4.  加入150 ul 乙酸鉀溶液,在旋渦混合器上搌蕩2 s,于冰上放置5 min。

     

    5.  離心3  min然后吸取0.4 ml 上清液移入干凈的微量離心管中,加0.8 ml  95%乙醇,于室溫靜置2 minI。

    6.  室溫離心3 min ,用1 ml 70%的酒精清洗沉淀,然后真空干燥。

    7.  沉淀用30 ul TE緩沖液重溶,保存,取2.5~5 ul進行酶切分析。

     




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