實驗方法原理 當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。
實驗材料 細菌克隆
試劑、試劑盒 LB培養基抗生素葡萄糖TrisEDTA NaOHSDS乙酸鉀乙醇水
儀器、耗材 離心機試管離心管制冰機
實驗步驟
1. 接種一個單菌落于5 ml無菌LB培養液中，在37°C培養至飽和狀態（過夜）。
2. 取1.5 ml培養液以最大轉速離心20 s。棄上清。
3. 沉淀用100 μl GTE溶液徹底重懸并于室溫靜置5 min。
4. 加人200 μl NaOH/SDS溶液，用指頭敲擊管壁混勻，于冰上放置5 min。
5. 加人150 μl乙酸鉀溶液，在渦旋混合器上振蕩2 s混勻，于冰上放置5 min。
6. 離心3 min，然后吸取上清液移人干凈的微量離心管中，加0. 8 ml 95%乙醇，于室 溫靜置2 min。
7. 室溫離心1min ，棄上清，用1 ml 70%的乙醇清洗沉淀，然后真空干燥。
8. 沉淀用30 μl TE緩沖液重溶，于4°C短期保存，于-20°C或-70°C長期保存，取 2. 5-5 μl進行酶切分析。
注意事項
1. 如有必要，在酶切反應液中加人1 μl 10 mg/ml RNA酶溶液（不含DNA酶）以去除污染的RNA。