一、材料與設備
小麥種子
分光光度計或光電比色計,燒杯,移液管,水浴鍋,試管,刀片,鑷子,青霉素小瓶,恒溫箱。
藥品
0.1%淀粉溶液:可溶性淀粉1克加蒸餾水50 ml ,沸水浴至淀粉完全溶解后,再加入KH2PO4 8.16克,待其溶解后定容至1000 ml 。
2×10-5 M GA3溶液:680毫克GA3溶于少量95%乙醇中,再定容至1000 ml 。
I2-KI溶液:0.600克碘化鉀和0.060克碘(I2)分別用少量0.05N HCl溶解后混合,用0.05N HCl定容至1000 ml
1%次氯酸鈉溶液。
10-3 M 乙酸緩沖液:10-3 M 乙酸鈉溶液590 ml 與10-3 M 乙酸溶液410 ml 混合后,加入1克鏈霉素,搖勻。
二、實驗步驟
1.選籽粒飽滿大小一致的大麥種子50粒,用刀片將每粒種子切成有胚和無胚的兩半,分別放入新配制的1%次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘,再取出用無菌水沖洗幾次。在無菌條件下,吸脹48小時。
2.將2×10-5 M 的GA3稀釋為2×10-6 M ,2×10-7 M ,2×10-8 M 的溶液;將10-3 M 乙酸緩沖液稀釋1倍。
3.取青霉素小瓶6個,編號,按下表加入試劑和材料:
 4.將小瓶放進恒溫箱中,在25℃下振蕩培養24小時。如無振蕩器,應經常搖動。
5.淀粉酶活力測定:從每個小瓶中吸取上清液0.2 ml 加入含1.8 ml /0.1%淀粉溶液的相應標號的試管中,混勻。然后于30℃水浴中準確保溫10分鐘(保溫時間最好經預備實驗確定,以光密度達0.4-0.6的反應時間為宜)。再加入I2-KI溶液2 ml ,用蒸餾水稀釋至5 ml ,充分搖勻。此溶液呈藍色,可用紅色濾光片或在580n M 的波長下比色。以蒸餾水作對照。 展 |