赤霉素對α－淀粉酶誘導形成實驗

實驗方法原理：大麥或小麥種子吸水萌動后，胚的糊粉層中便產生赤霉素。這些赤霉素被釋放到胚乳中后，能誘導，提高一些水解酶如β－1，3－糖苷酶，蛋白酶，核糖核酸酶，α－淀粉酶等酶的活性。其中研究得最徹底，最深入的是赤霉素對大麥糊粉層中α－淀粉酶誘導形成。赤霉素誘導或提高一些水解酶的活性對種子萌發過程中的物質轉化和器官建成具有重要意義。沒有胚的種子由于不能產生赤霉素，胚乳中便沒有α-淀粉酶。

實驗步驟：一、材料與設備

小麥種子

分光光度計或光電比色計，燒杯，移液管，水浴鍋，試管，刀片，鑷子，青霉素小瓶，恒溫箱。

藥品

0.1%淀粉溶液：可溶性淀粉1克加蒸餾水50 ml ，沸水浴至淀粉完全溶解后，再加入KH₂PO₄ 8.16克，待其溶解后定容至1000 ml 。

2×10^－5 M  GA3溶液：680毫克GA3溶于少量95%乙醇中，再定容至1000 ml 。

I2－KI溶液：0.600克碘化鉀和0.060克碘（I2）分別用少量0.05N HCl溶解后混合，用0.05N HCl定容至1000  ml

1%次氯酸鈉溶液。

10^－3 M 乙酸緩沖液：10^－3 M 乙酸鈉溶液590  ml 與10^－3 M 乙酸溶液410  ml 混合后，加入1克鏈霉素，搖勻。

二、實驗步驟

1．選籽粒飽滿大小一致的大麥種子50粒，用刀片將每粒種子切成有胚和無胚的兩半，分別放入新配制的1%次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，再取出用無菌水沖洗幾次。在無菌條件下，吸脹48小時。

2．將2×10^－5 M 的GA3稀釋為2×10^－6 M ，2×10^－7 M ，2×10^－8 M 的溶液；將10^－3 M 乙酸緩沖液稀釋1倍。

3．取青霉素小瓶6個，編號，按下表加入試劑和材料：

4．將小瓶放進恒溫箱中，在25℃下振蕩培養24小時。如無振蕩器，應經常搖動。

5．淀粉酶活力測定：從每個小瓶中吸取上清液0.2  ml 加入含1.8  ml /0.1%淀粉溶液的相應標號的試管中，混勻。然后于30℃水浴中準確保溫10分鐘（保溫時間最好經預備實驗確定，以光密度達0.4－0.6的反應時間為宜）。再加入I2－KI溶液2  ml ，用蒸餾水稀釋至5  ml ，充分搖勻。此溶液呈藍色，可用紅色濾光片或在580n M 的波長下比色。以蒸餾水作對照。