赭曲霉毒素A的HPLC檢測（一）

赭曲霉毒素A（OTA）是一種有毒并可能致癌的霉菌毒素，國家標準方法一般使用薄層色譜法對飼料中的OTA進行檢測，但操作上人為因素影響大，重復性差，且使用的試劑毒性較大。本文使用安捷倫Bond Elut Plexa PAX混合型強陰離子交換固相萃取前處理方法結合LC熒光檢測器對飼料中的OTA進行分析，同樣具有很好的選擇性以及低的檢測限，完全滿足國家標準中對于飼料中OTA檢測的要求。不同的添加濃度（在1~100ppb的線性范圍內）OTA在飼料中的添加回收率范圍均在85%~99%左右，RSD均小于2.2%，方法具有很好的準確度和重復性。

赭曲霉毒素是一種有毒并可能致癌的霉菌毒素，不少食品都含有這種毒素。赭曲霉毒素屬次級代謝物毒素組群，由曲霉菌屬 （Aspergillus）或青霉菌（Penicillium）的幾種真菌產生，屬于弱有機酸，為異香豆素的衍生物。赭曲霉毒素分為A，B，C三種；三者在化學結構上只有細微差異，但在毒性方面卻有很大差別。赭曲霉A，B，C三種毒素中以赭曲霉毒素A（OTA）最為常見，毒性也是最強的，主要影響肝臟和腎臟。OTA主要存在于谷物、谷物產品、水果、咖啡、嬰兒食品、葡萄干、葡萄酒和啤酒中,歐洲在整體膳食評估中對食品中OTA進行了分析,結果發現歐洲人從谷物中攝取到的OTA占到總攝取量的50%,因此，OTA在飼料中的污染情況日益受到人們的關注。

國家標準方法一般使用薄層色譜法對飼料中的OTA進行檢測，但操作上人為因素影響大，重復性差，且使用的試劑毒性較大。本方法使用安捷倫Bond Elut Plexa PAX混合型強陰離子交換固相萃取前處理方法結合LC熒光檢測器對飼料中的OTA進行分析，同樣具有很好的選擇性以及低的檢測限，完全滿足國家標準中對于飼料中OTA檢測的要求。不同的添加濃度（在1~100ppb的線性范圍內）OTA在飼料中的添加回收率范圍均在85%~99%左右，RSD均小于2.2%，方法具有很好的準確度和重復性。

圖1. SPE操作過程。

實驗部分

儀器與試劑

乙腈，甲醇，乙酸均為色譜純，甲酸，氨水為分析純，試驗用水為高純去離子水；OTA標準品，10μg/ml甲醇溶液；飼料為配合飼料。

1260 Infinity HPLC，配FLD檢測器，安捷倫；液相色譜柱為Agilent Poroshell 120 SB-C18 （4.6×75mm，2.7μm） PN. 687975-902；安捷倫Vac Elut 12固相萃取裝置，P/N. 5982-9110；安捷倫可控針閥，P/N.12131005；安捷倫PTFE 15mm直徑2UM過濾膜：P/N. 5190-5084；安捷倫Bond Elut Plexa PAX 200mg，6ml，P/N. 12107206 ，美國安捷倫公司；IKA 干磨機，A11 Basic Analytical Mill，配A11.2剪切刀頭；IKA渦旋機，MS 3基本型。

圖2. 連續6針進樣OTA色譜圖。

實驗方法

標準品配制

工作曲線的的配置，取10μg/ml OTA標準品作為母液，用乙腈-水（40:60，含1%乙酸）溶液稀釋分別配制濃度為1ng/ml，2.5ng/ml，5ng/ml，10ng/ml，50ng/ml，100ng/ml OTA標液制作工作曲線。

圖3. 1ppb濃度OTA靈敏度譜圖。