超實用原代細胞培養小知識

很多老師在設計科研實驗的時候都會很迷茫，到底用什么細胞好？ 越來越多的老師開始傾向于原代細胞的科研實驗，在設計實驗中，原代細胞和細胞株到底該怎么選擇呢？

原代細胞的定義：

原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，我們通常把第1代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。

原代細胞因為可以模擬機體的功能，主要用于：生物醫藥產業如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究

下面我們整理了一些培養原代細胞的小知識：

解凍

原代細胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中，保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶，并轉移到無菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養箱中，我們在使用cell systems的原代視網膜內皮細胞時，復蘇的時候沒有去離心，第二天換個液就可以。

傳代

原代細胞有間隙抑制接觸不良反應，所以細胞不能到達100%的密度的時候傳代，一般蕞有效的建議觀察細胞的生長周期，Cell Systems的原代細胞在細胞密度達到85%左右的時候傳代蕞佳，當生長至100％匯合時，它就會衰老。記住，所有的原代細胞不是100％純，因此我們要盡量減少污染細胞的生長。當細胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶，并在顯微鏡下密切監測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。

凍存

通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感，重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。

與細胞系不同，原代細胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型，你應該密切監測細胞形態，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。

正常的原代細胞培養，在無污染的情況下，建議培養基中不加抗體，抗體會影響細胞的某些基因變異從而導致實驗數據有差異，所以cell systems的細胞在分離提取時就考慮到這點，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度，這樣得到的實驗數據更為準確。