超濾法濃縮蛋白質溶液實驗

微型濃縮器初始容量有 2 ml 以及更小的，2 mg/ml 的牛血清蛋白（BSA）樣品 2 ml 離心 30 min 可使體積濃縮至 50 ul 以下，然而濃縮的時間依所用超濾膜的類型、緩沖液的組成以及蛋白質的種類和濃度等因素而定。通過向濃縮的蛋白質溶液中加入新緩沖液及再離心，能很方便地更換蛋白質溶液的緩沖液和脫鹽，四種型號濃縮器 Centricon-3、10、30 和 Centricon-100 分別能截留平均分子量為 3，10, 30 和 100 kD 的蛋白質組分。

蛋白質溶液

Amicon Centricon 微型濃縮器磁力攪拌器和攪拌子

1. 組裝 Centricon 微型濃縮器并加 2 ml 樣品到樣品池內；

圖 1 用 Amicon Centricon 濃縮系統濃縮蛋白質溶液

2. 5000 × g 離心 30 min；

3. 去掉樣品池的過濾管，蓋上回收管；

4. 倒置濃縮器 1000 × g 離心 2 min；

5. 濃縮樣品將移入回收管。另外用少量緩沖液洗滌濾器，能較完全地回收蛋白質。

1. 離心時間依樣品性質而定。 一般含有甘油的黏性溶液或蛋白質濃度較高時，需要離心時間較長。

2. 在典型的蛋白質回收率可高達 90％ 以上。

3. 目的蛋白的分子置應大于濃縮器截流組分分子量的 30％～50％， 以確保目的蛋白截留成功。

4. 不同的濾膜具有不同的平均孔徑，有利于根據蛋白質的大小選擇合適的濾膜去濃縮蛋白。

5. Centricon 微量濃縮器的設計適用于固定角度的離心轉頭。由恰當的離心轉頭角度，使樣品在達到死腔體積為 25～40 ul 時，不進一步濃縮，這樣防止了樣品被濾干。

6. 其他離心的超濾系統還有 Amicon Centriflo （7 ml 容積）和 Centriprep （15 ml 容積）兩種濃縮器。

7. 為了濃縮大體積的樣品，采用加壓超濾系統耗時較長。Amicon 生產的帶攪拌室超濾系統可適用于幾百毫升溶液的濃縮。更大體積時則使用螺旋狀的、蜂窩狀纖維、或盒型膜裝置。

8. Penefsky （1977）提出了一種可用于凝膠過濾脫鹽的簡單離心柱。