雖然傳統的顯微鏡檢驗和快速診斷檢驗(RDT)適于診斷顯現癥狀的瘧疾感染,但還需要更靈敏的檢驗篩查不顯癥狀的低密度感染。近日,科學家開發出一種改進型測定可檢測核糖核酸(RNA)與DNA,從而利用少量血液中RNA拷貝數高的特點,用一種穩定化試劑保存針刺指尖或耳垂所獲少量血液中的核酸,該過程只需很少的樣本處理,且無需冷鏈。
美國馬里蘭大學醫學院的科學家及其同行收集了緬甸東南部三個鎮的血樣。收集的指血用于現場執行韓國龍仁市標準診斷股份有限公司的瘧疾Ag P.f/Pv, RDT,把0.3毫升血放入采集管。用凱杰公司(Qiagen; Valencia, CA, USA)的QIAamp 96 DNA血液試劑盒從200微升血液/穩定劑混合物中提取總核酸,但又用50微升緩沖液洗脫。
科學家開發了一種逆轉錄聚合酶鏈反應(RT- PCR),用于惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲18S核糖體RNA基因和核糖體RNA的多重檢測。將仿真現場的樣本保存14天,用樣本保存緩沖液來評估分析靈敏度和特異性。此外又用RDT和超靈敏RT-PCR檢驗了緬甸東南部的1,750份現場樣本,后者在羅氏診斷公司(Indianapolis, IN, USA)的Lightcycler 96或480實時PCR儀上運行。
在仿真現場條件下確定檢測限(LoD),惡性瘧原蟲的檢測限是16條寄生蟲/毫升以下,間日瘧原蟲的檢測限是19.7份拷貝/微升(用質粒替代物),大約是RDT的萬分之一。超靈敏RT-PCR和RDT都成功評估的1,739份樣本中,RDT只判兩份為陽性,而用超靈敏RT-PCR測得24份惡性瘧原蟲陽性、108份間日瘧原蟲陽性以及127份或為間日瘧原蟲陽性或為惡性瘧原蟲陽性。