（6） 為保暖包裹小鼠于紗布中或將其放置于熱墊內使其蘇醒，處于麻醉狀態
下的小鼠應該嚴格監護直到其完全蘇醒。手術后小鼠飼養2周后確定手術是否成功。
（7） 實驗性飼養：將1-2只母鼠與輸精管切除小鼠合籠飼養，次晨進行陰道栓檢查。有陰道栓的母鼠，用磷酸緩沖液處理后24小時，其輸卵管潮紅。卵細胞應該處于單細胞期或未受孕狀態，若處于雙細胞期，則輸精管切除未完全，雄性小鼠應進行再篩選。
3．受精卵的收集
（1）受精卵的采集：受精卵獲得的方法分自然排卵和激素誘發排卵以及體外受精三種方法。本章對誘發排卵法給予介紹。
誘發排卵法：雌性小鼠生后6—8周達到性成熟，性周期均為4—5 日，其排卵時間可用飼養室的明亮和黑暗進行調節，所以必須對飼養室的明暗規律進行準確嚴格地管理。
性周期是卵泡刺激素和黃體生成素相互作用的結果，我們可以從外部給予這些激素誘發排卵。向成熟雌小鼠腹腔內注射5國際單位(IU)的孕馬血清促性腺激素(PMSG)之后，約在48—54h后再將2.5-5.0 IU的人絨毛膜促性腺激素(hCG)注射于同一小鼠腹腔內，約12h后即可誘發排卵。排卵數量可達自然排卵的2倍，效果很好。雌小鼠給予hCG后應立刻與雄性合籠。成熟雄小鼠應按每籠飼養1只，雄性小鼠大小在12周齡到1年。合籠時，須將激素化雌性小鼠放進雄小鼠的籠中。雄小鼠釋放促雌性發情的外激素，在交配過程中建議不換籠，交配過的雄小鼠，間隔一周后才進行下次交配。
顯微注射的受精卵最好于交配后次晨注射前幾小時收集，此時易進行注射操作。交配后過夜小鼠的陰道栓易見，可用交配指示劑指示。對超排卵的交配母鼠體內進行陰道栓計數一般正常。低比率的有栓母鼠說明促性腺激素失去效力或雄性小鼠交配過度或雄性小鼠老齡化。收獲受精卵必須打開小鼠腹腔，輸卵管必須仔細切開。輸卵管沖洗術或輸卵管壺部切開術都可作為收集受精卵的方法。
（2）腹腔內輸卵管的切開
1） 通過斷頸或二氧化碳吸入快速處死小鼠。
2） 將動物背位固定在無菌干燥的吸水紙上，剪毛并用70%的乙醇徹底涂搽手術部位。以避免毛發污染手術視野。
3） 持眼科鑷捏緊下腹部正中線皮膚，用外科剪作小的橫切口，剪刀鈍性分離充分暴露手術視野，或鈍性撕開皮膚暴露腹膜。用眼科剪打開腹膜，充分暴露腹腔與子宮角部手術視野。子宮為Y形，為起自盆腔膀胱后的肌性器官，向上分支為兩側子宮角，向上橫行深入腹腔。
4） 用鑷子距輸卵管卵巢6-7mm處夾持子宮角翻轉后輕輕拖出腹腔，在鑷子捏點下部子宮角下方附近刺破腸系膜，清除腸系膜組織遠離子宮角與輸卵管，并防止用力過大壓破子宮角與輸卵管連接處。
5） 用鑷子拖出脂肪墊，卵巢，輸卵管以及子宮部件。小心剪掉卵巢與輸卵管之間的薄層膜，然后剪下輸卵管和部分子宮角，將其盛放在盛工作液的小玻璃皿中，對另一側輸卵管重復上面操作，完畢后如上處理下一只動物。
（3）離體輸卵管內受精卵的收集：解剖鏡下觀察近輸卵管漏斗部上部明顯潮紅此為壺腹部。用眼科鑷子撕開膨大的壺腹部即看到包繞受精卵的丘細胞團。
1）轉移輸卵管于含工作液的小玻璃皿中。
2）眼科鑷子夾持壺腹部，并用另一只眼科鑷子撕開膨大的輸卵管，游離的受精卵慢慢流出，也可以用鑷子輕輕擠壓輸卵管將受精卵推出裂口。
（4）透明質酸酶處理與受精卵的漂洗
工作液中受精卵可能成團狀，微注射用的受精卵必須是單個細胞，而且無細胞碎片。漂洗細胞時，首先用工作液除去細胞碎片。不成團細胞可用無菌移液管收集到盛工作液的玻璃小皿中，注意把握移液管的張力。溶解在工作液中的透明質酸酶對細胞團以及復合體進行消化時必須嚴密觀察，一旦細胞團溶解立即將單細胞轉移到新鮮工作液中，防止消化過度。
用工作液漂洗2-3次，清除碎片后，用無菌移液管將受精卵置于特殊培養基（M16），放于37?C, 5% CO2孵箱中待注射，此培養基上層覆蓋高壓消毒礦物油，可防止污染同時防止培養基水分蒸發影響pH。受精卵在體外發育較體內快，在孵育過程中注意觀察一些受精卵清晰可見原核形成，在此期間可先選出原核清晰的卵(形態稍不規則)用于注射，其它卵繼續培養。注射后，再篩選，再注射，直至得到滿意的注射卵數。