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  • 發布時間:2019-04-10 16:28 原文鏈接: 轉基因植株的選擇實驗——轉基因植物的分析

    實驗材料

    葉片

    試劑、試劑盒

    液氮DNA 純化試劑盒bar 基因引物吐溫PPT

    儀器、耗材

    PCR 分析塑料盆

    實驗步驟

    一、PCR 分析

    1. 當植株長到合適大小時(即 3 ~4 張葉片),取約 2 cm 長的葉片,立即放于液氮中,抽提基因組 DNA。

    2. 在液氮中將葉片磨成粉末狀,并使用 Wizard 基因組 DNA 純化試劑盒提取基因組 DNA。

    3. 為了確定是否為轉基因植株,利用 bar 基因引物 1 和引物 2 對 DNA 做 PCR 分析,退火溫度為 57℃。

    4. 將 PCR 陽性植株移栽到直徑為 13 cm 的塑料盆中,并繼續在轉基因封閉溫室中生長。

    二、除草劑葉片涂抹檢測

    1. 用 0.1% 吐溫將除草劑母液(如 Challenge) 稀釋成兩種濃度,其活性成分 PPT 濃度分別為  2.0 g/L 和 0.2 g/L。

    2. 每個待測植株,盡可能在不同分蘗上選擇三張大小相近、生長健壯的葉片,避免取旗葉。立即在所選葉片植株的莖稈上做標記,分別標注為 0.2 g/L PPT、2.0 g/L PPT 和 對照(0.1% 吐溫)處理。

    3. 用圓珠筆在每張葉片長度一半的位置做標記用棉簽蘸取適量溶液涂抹于葉片遠端的半張葉片表面。

    4. 為使除草劑生效,將植株放置 7 天后再評估抗/感情況。

    5. 在涂抹了除草劑溶液的位置,根據除草劑溶液涂抹區域干枯傷害的百分率和除草劑轉運對葉片近端區域傷害的百分率,對每張處理的葉片進行評分。

    6. 如果 0.2 g/L PPT 和 2.0 g/L PPT 處理的葉片都沒有檢測到傷害癥狀,則可認為這一植株是轉基因的;如果只在低濃度處理下表現出抗性,應當再用其他方法進行確認。



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