實驗材料 幼胚盾片
試劑、試劑盒 2 4-D AgNO3毒莠定特美汀草銨膦玉米素
儀器、耗材 誘導培養基再生培養基
實驗步驟
1. 將可能含有轉化細胞的幼胚盾片置于愈傷誘導培養基上培養產生愈傷組織，誘導培養基中添加 0.5 mg/L 2 , 4-D 和 10 mg /L AgNO3。對農桿菌處理過的培養物，培養基中還應加入 2 mg/L 毒莠定和 160 mg/L 特美汀，愈傷組織誘導培養在黑暗條件下進行，同時在這一階段可加入選擇劑 2~6 mg/L 草銨膦。
2. 3 或 4 周后將愈傷組織從誘導培養基轉移至第一輪再生培養基，添加 0.1 mg/L 2 ,4 -D、25 mg/L CuSO4 和 5 mg/L 玉米素，并在持續的光照條件下培養。對農桿菌處理過的培養物，還要加入 160 mg/L 特美汀。可在這一階段加入選擇劑草銨膦 2~6 mg/L。
3. 3 或 4 周后評價再生/選擇反應。再生的愈傷組織轉移至添加了 5 mg/L 玉米素和 2~6 mg/L
選擇劑草銨膦的第二輪再生培養基上繼續培養 3~4
周。將一半非轉基因對照的愈傷組織置于添加有選擇劑的再生培養基上培養，另一半則在無選擇劑的再生培養基上培養，分別作為選擇對照和非選擇對照。
4. 3 或 4 周后評價再生反應和選擇反應。
5. 為確保降低非轉基因細胞（或組織）的混入，只轉移具有健壯綠芽或苗的部分至添加有 4~6 mg/L 草銨膦的再生培養基上，在 Magenta 培養盒（Sigma- Aldrich) 中繼續培養 3~4 周。
6. 一旦再生苗長到 10~15 cm 長并有適當的根系時，就將這些可能的轉基因植株移栽到含有特制土肥的 8 cm 塑料方盆中，并置于轉基因封閉溫室中生長。
實驗材料 葉片
試劑、試劑盒 液氮DNA 純化試劑盒bar 基因引物吐溫PPT
儀器、耗材 PCR 分析塑料盆
實驗步驟
一、PCR 分析
1. 當植株長到合適大小時（即 3 ~4 張葉片），取約 2 cm 長的葉片，立即放于液氮中，抽提基因組 DNA。
2. 在液氮中將葉片磨成粉末狀，并使用 Wizard 基因組 DNA 純化試劑盒提取基因組 DNA。
3. 為了確定是否為轉基因植株，利用 bar 基因引物 1 和引物 2 對 DNA 做 PCR 分析，退火溫度為 57℃。
4. 將 PCR 陽性植株移栽到直徑為 13 cm 的塑料盆中，并繼續在轉基因封閉溫室中生長。
二、除草劑葉片涂抹檢測
1. 用 0.1% 吐溫將除草劑母液（如 Challenge) 稀釋成兩種濃度，其活性成分 PPT 濃度分別為 2.0 g/L 和 0.2 g/L。
2. 每個待測植株，盡可能在不同分蘗上選擇三張大小相近、生長健壯的葉片，避免取旗葉。立即在所選葉片植株的莖稈上做標記，分別標注為 0.2 g/L PPT、2.0 g/L PPT 和 對照（0.1% 吐溫）處理。
3. 用圓珠筆在每張葉片長度一半的位置做標記用棉簽蘸取適量溶液涂抹于葉片遠端的半張葉片表面。
4. 為使除草劑生效，將植株放置 7 天后再評估抗/感情況。
5. 在涂抹了除草劑溶液的位置，根據除草劑溶液涂抹區域干枯傷害的百分率和除草劑轉運對葉片近端區域傷害的百分率，對每張處理的葉片進行評分。
6. 如果 0.2 g/L PPT 和 2.0 g/L PPT 處理的葉片都沒有檢測到傷害癥狀，則可認為這一植株是轉基因的；如果只在低濃度處理下表現出抗性，應當再用其他方法進行確認。