1. 提取cDNA質粒；
2. 線性化質粒：（利用單一的酶切位點線性化有利于轉錄）
3. 純化質粒：（盡量避免RNase污染） ① 加等體積的Tris-苯酚：氯仿（1:1）到100μL限制內切酶消化體系，渦旋振蕩20s, 13000g離心5min; ②上清轉移，加入2倍體積無水乙醇和1/10體積的3M的醋酸鈉（pH5.2），-20℃放置不少于2h或過夜放置; ③DNA質粒13000g離心5min ,并且用20μL H2O重懸，放于-20℃。
4. 體外轉錄：（根據以下組成配制反應液，輕輕混勻）
10*basal reaction buffer
2μL 5*accelerator solution
4μL 25mM rNTPs mixture
4.5μL RNase Inhibitor
0.5μL Template DNA
100ng-1μg Thermo T7 RNA polymerase
1μL Nuclease-free water
up to 20μL Total volume 20μL
5. 在37℃-42℃下放置2小時。
6. 轉錄產物可通過1%非變性瓊脂糖來檢測：取產物1μL,160V電壓，結果應為兩條帶， 上為DNA模板，下為RNA 產物。
注意： 1. 模板DNA（環狀或線型）：必須具有T7啟動子位點。同時，模板應為RNase-free級。在 質粒提取過程中如使用了RNase,必須通過苯酚·氯仿處理等方法除去RNase。