轉運反應成分的制備實驗——細胞通透化

細胞

毛地黃皂苷轉運緩沖液

1. 制備用于同透化的細胞

(1) 對于在蓋玻片上生長的細胞

① 將在標準條件下培養的細胞或從組織采集的原代細胞鋪在置于 6 孔培養板中的 18x18 mmol/L 的蓋玻片上，生長過夜。

② 實驗前 2~4 小時，換新培養液，重新放回培養箱中。

③ 吸出培養基，用轉運緩沖液清洗細胞兩次。

④ 將細胞轉入含有轉運緩沖液和 40~50 μg/ml 的毛地黃皂苷的 Coplin 缸或載玻片容器中，或者用 2 ml 含毛地黃皂苷的轉運緩沖液換掉 6 孔培養板中的緩沖液。孵育 5 分鐘。

(2) 懸浮培養的細胞

① 培養細胞至半對數生長期，500 g 離心 5 分鐘收集細胞。

② 用轉運緩沖液 500 g 離心 5 分鐘清洗細胞兩次。

③ 用含 40~50 μg/ml 毛地黃皂苷的轉運緩沖液重懸浮細胞，濃度為 5x10⁵ 細胞/ml 孵育 5 分鐘。

2. 去掉毛地黃皂苷溶液，換上新鮮的轉運緩沖液。

3. 通過細胞排阻臺盼藍情況監測通透化程度。