軟瓊脂克隆形成實驗可用于：（1）細胞分化的基礎研究；（2）臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。
| 實驗方法原理 | 軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞(如正常成纖維細胞)在懸浮狀態下不能增殖，不適用此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下也能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映了其惡性程度。 |
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| 實驗材料 | 細胞樣品 |
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| 試劑、試劑盒 | 胰蛋白酶胎牛血清GIMSA染液PBS純甲醇 |
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| 儀器、耗材 | 培養皿培養箱顯微鏡 |
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| 實驗步驟 | 1. 取對數生長期的細胞，0.25％胰酶消化，離心收集細胞沉淀。
2. 完全培養基重懸，適當稀釋后活細胞計數，調整細胞密度至1×103／ml。
3. 取0.5ml細胞懸液（即500個細胞），加入培養基，使體積達到9.4ml，37℃孵育。
4. 底層瓊脂的制備。5％瓊脂置沸水浴中，使之完全融化，取出1ml移人無菌小燒杯中，待冷卻到50℃時，迅速加入9ml預溫37℃的完全培養基，混勻后立即取0.8ml澆注24孔板，室溫凝固。
5. 上層瓊脂的制備。步驟3中預溫的9.4ml細胞懸液中加入0.6ml 50℃的5％瓊脂，迅速混勻，立即取0.8ml澆入24孔板，置室溫凝固。每孔即含有40個細胞，一般每個實驗組重復3個樣本。
6. 常規培養2——3周。
7. 將培養板置于顯微鏡下計數克隆數，每個細胞集落含50個或大于50個細胞為1個克隆，以公式集落數=n孔中細胞集落數總和／n，克隆形成率=集落數／接種細胞數x100％計算克隆形成率，最后拍照。
8. 統計學分析。根據集落數和克隆形成率進行t檢驗，分析不同組別之間的差異。 展開 |
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| 注意事項 | 1. 取對數生長期的細胞，0.25％胰酶消化，離心收集細胞沉淀。
2. 完全培養基重懸，適當稀釋后活細胞計數，調整細胞密度至1×103／ml。
3. 取0.5ml細胞懸液（即500個細胞），加入培養基，使體積達到9.4ml，37℃孵育。
4. 底層瓊脂的制備。5％瓊脂置沸水浴中，使之完全融化，取出1ml移人無菌小燒杯中，待冷卻到50℃時，迅速加入9ml預溫37℃的完全培養基，混勻后立即取0.8ml澆注24孔板，室溫凝固。
5. 上層瓊脂的制備。步驟3中預溫的9.4ml細胞懸液中加入0.6ml 50℃的5％瓊脂，迅速混勻，立即取0.8ml澆入24孔板，置室溫凝固。每孔即含有40個細胞，一般每個實驗組重復3個樣本。
6. 常規培養2——3周。
7. 將培養板置于顯微鏡下計數克隆數，每個細胞集落含50個或大于50個細胞為1個克隆，以公式集落數=n孔中細胞集落數總和／n，克隆形成率=集落數／接種細胞數x100％計算克隆形成率，最后拍照。
8. 統計學分析。根據集落數和克隆形成率進行t檢驗，分析不同組別之間的差異。 展開 |
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| 其他 | 1. 在進行軟瓊脂克隆形成實驗時，首先細胞計數要準確，可以重復計數，取平均值。其次在實驗的操作過程中，很多步驟可能會引起污染，這個問題一定要注意。
2. 在將細胞懸液和瓊脂混合的時候，一定要把握好瓊脂的溫度，太高時，容易引起部分細胞死亡，太低則容易使局部結塊。
3. 關于選擇接種多少細胞的問題，24孔板一個孔，30——50個細胞已足夠。太少，結果不準確；太多，計數太麻煩。當然，這還要根據細胞增殖能力或者說惡性程度來決定。當細胞增殖能力非常強時，可選擇少接種一些細胞；當細胞增殖能力很弱時，可增加細胞接種數。
4.來源《分子生物學實用實驗技術》。 展開 |
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