辛酸硫酸銨法從人血清中純化IgG

一、實驗目的

1、初步掌握從血清中提取純化IgG的方法步驟。

2、了解辛酸-硫酸銨法純化IgG 的原理。

二、實驗原理

辛酸-硫酸銨法分兩步進行。第一步用辛酸沉淀雜蛋白，辛酸為短鏈脂肪酸，在酸性條件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白質；第二步利用硫酸銨鹽析將Ig沉淀下來，操作步驟如圖3-10所示。經SDS-PAGE電泳檢測能得到電泳純度較高的Ig。

三、儀器、原料和試劑

1、儀器

磁力攪拌器、離心機、低溫冰柜。

2、原料

抗血清（兔抗雞血清）。

3、試劑

(1) 乙酸-乙酸鈉緩沖液：60mmol/L，pH4.0。

(2) 10×磷酸鹽-NaCl 緩沖液（PBS）：100mmol/L PBS，pH7.4。稱NaCl 80g、Na2HPO412H2O 29g、KCl 2g、KH2PO4 2g，加蒸餾水溶解，加入100mmol/L EDTA 20ml，用去離子水定容至l000ml。

(3)  透析液 10mmol/L Na2HPO4-KH2PO4緩沖液，含15mmol/L NaCl，pH7.2。

(4) 硫酸銨。

(5) 辛酸。