過氧化物酶(POX)染色

實驗原理
　　血細胞中的過氧化物酶(Peroxidase,POX或MPO)能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態氧，使無色聯苯胺氧化為藍色聯苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結合形成藍黑色的顆粒，沉著于細胞質中。

實驗方法

　　材料：

　　1.1%TMB

　　2.亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液

　　3.1%過氧化氫溶液

　　4.稀過氧化氫溶液

　　5.瑞氏染色液

　　6.新鮮涂片(骨髓或者血片)、染色架、顯微鏡等

　　方法：

　　1.取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10?l，溶液呈淡棕黃色。

　　2.在新鮮干燥的血片上，加混合溶液0.5ml，放置lmin后，再加稀過氧化氫溶液0.7ml，染色6min。

　　3.自來水沖洗，待干，瑞氏染液復染15～20min。

　　4.自來水沖洗，待干，油鏡鏡檢。

實驗結果計算

　　細胞質內有藍黑色顆粒者為陽性。

　　（－）無顆粒沉著；

　　（±）顆粒細小，分布稀疏；

　　（+）顆粒較粗，局灶分布；

　　（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質1/2~2/3；

　　（+++）顆粒粗大，呈團塊分布，幾乎布滿胞質；

　　（++++）全部胞質均布滿顆粒，可覆蓋胞核。

注意事項

　　1.血涂片和骨髓片應該新鮮制作，涂片應該厚薄適宜；

　　2.TMB配置在85%~88%的乙醇溶液中效果較好，勿用90%~95%乙醇，否則細胞表面蛋白質很快凝固，妨礙試劑向胞內滲入而導致染色效果差；

　　3.H2O2需新鮮配置，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細胞看不見顆粒，紅細胞呈棕色或者綠色，即表示H2O2過濃。若H2O2加于玻片上無氣泡，則表示無效；

　　4.染色液pH為5.5；

　　5.試劑應置于低溫暗處，防止應光線照射而失效。