過碘酸雪夫（PAS）染色

實驗原理
　　胞漿內存在糖原或多糖類物質（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）經過碘酸（periodicacid）氧 化，轉變為二醛基（CHO-CHO），與雪夫(Schiff)試劑中的無色品紅結合，形成紫紅色染料而沉積于細胞內多糖所在處。該反應稱為過碘酸-雪夫 (PAS)陽性反應，以前也稱為糖原染色。
實驗方法
　　材料：
　　1.高碘酸氧化液：
　　HIO4·2H2O1g,
　　蒸餾水加至100ml。
　　此液溶解后保存于冰箱中待用。
　　2.Schiff試劑：
　　將1g堿性品紅溶于200ml煮沸的蒸餾水中。搖蕩5分鐘，冷卻至600C左右，過濾，并向濾液中入1mol/LHCl20ml，混勻。冷至 250C時，加2g偏重亞硫酸鈉（或鉀）（Na2S2O5）。將此液置帶塞的棕色玻璃瓶中，放暗處24小時。加1g活性碳，搖動1分鐘，濾紙過濾。保存于 冰箱中。
　　3.亞硫酸液
　　100g/L偏重亞硫酸鈉6ml
　　1mol/L鹽酸5ml
　　蒸餾水100ml
　　每次用前新鮮配置。
　　4.20g/L甲綠
　　甲綠2g
　　蒸餾水加至100ml
　　5.淀粉酶嚼石蠟刺激分泌唾液離心取上清液，內含淀粉酶，將麥芽糖淀粉酶0.1~1.0g溶于0.02mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.0）100ml中。
　　方法：
　　1.固定新鮮干燥的涂片用品5%乙醇固定10min，蒸餾水沖洗，待干；
　　2.如涂片需要消化，可加唾液或麥芽糖淀酶，置室溫消化60min，然后用蒸餾水沖洗；
　　3.10g/L高碘酸氧化15～20min,蒸餾水沖洗，待干；
　　4.置雪夫染液中室溫染色30～60min；
　　5.用亞硫酸溶液沖洗3次后，再用自來水沖洗2～3min，待干；
　　6.20g/L甲綠復染10～20min；
　　7.水洗，待干，鏡檢。
實驗結果計算
　　（1）中性粒細胞糖原含量參考標準：
　　（-）胞質無顆粒
　　（+）胞質呈淡紅色，無顆粒
　　（++）胞質呈紅色，有少量顆粒
　　（+++）胞質呈暗紅色，顆粒較密
　　（++++）胞質呈紫紅色，顆粒極密
　　（2）淋巴細胞系：
大多數淋巴細胞呈陰性反應，少數為（+）的陽性反應。
　　淋巴細胞糖原含量程度參考標準
　　（-）胞質內無顆粒
　　（+）胞質內有顆粒
　　（++）有較粗紅色顆粒
　　（+++）有粗大紅色顆粒
　　（++++）顆粒粗大并有紅色塊狀
　　（3）紅細胞系：
　　幼紅細胞和紅細胞呈陰性反應
　　紅細胞系列糖原含量程度參考標準
　　（-）胞質無顆粒
　　（+）有少數紅色顆粒
　　（++）有較粗紅色顆粒或彌漫紅色
　　（+++）有粗大紅色顆粒或深紅色
　　（++++）有粗大紅色塊狀或紫紅色
　　（4）巨核細胞：
　　巨核細胞和血小板染色反應均為陽性
　　巨核細胞糖原含量程度參考標準
　　（-）胞質無顆粒
　　（+）少量糖原包涵體
　　（++）中等量糖原包涵體，定位于核膜出或分散胞質中，占胞質1/3
　　（+++）大量糖原包涵體分散于胞質的1/2
　　（++++）糖原包涵體充滿整個胞質
　　（5）單核細胞呈陰性或陽性，顆粒細小，往往位于胞質邊緣：
　　漿細胞大多呈陰性，少數為紅色顆粒陽性；
　　組織細胞為陰性反應；
　　巨噬細胞可呈陽性，為紅色顆粒反應。
注意事項
　　1.所用染色缸及器具應十分清潔、干燥；
　　2.固定試劑不同，染色效果不同。目前較常用的有95%乙醇、純甲醇及甲醛蒸氣，其中乙醇固定后糖原顆粒明顯，各成熟粒細胞的反應有較明顯的顏色差異，易于判斷陽性反應的程度，且唾液消化后的對照標本沒有假陽性，故通常選用乙醇為固定劑；
　　3.10g/L高碘酸溶液質量要保證，變黃則不能用，氧化時間要準確，否則將導致假陽性或假陰性；
　　4.堿性品紅試劑對染色的影響不同品牌的堿性品紅染色效果不一，堿性品紅的質量是試驗成敗的關鍵因素之一。希夫(Schiff)染液應避光保存，無色，變紅則失效；
　　5.染色后標本應及早觀察和記錄，染色后標本保存8天后，將逐漸褪色，保存時間延長，褪色更為明顯。