連接酶鏈反應(Ligase chain reaction,LCR),是在連接酶擴增反應或連接酶檢測反應的基礎上,引入熱穩定的連接酶而建立的類似PCR 技術的新方法。LCR 既可擴增,又可鑒定D N A 異常,與PCR 技術一樣可用于已知病因的遺傳病大面積普查。
LCR ,即在D N A 連接酶的作用下,通過連接與模板D N A互補的兩個相鄰寡核苷酸鏈,快速進行D N A 片段擴增。D N A連接酶可將與模板D N A 鏈互補的兩條毗鄰寡核苷酸片段連接起來,兩條寡核苷酸鏈接頭處存在堿基錯配則阻止連接反應的發生。所以通過連接酶反應,可明確區分寡聚核苷酸是否與模板D N A 完全互補,檢測基因點突變。耐熱D N A 連接酶在不同溫度組成的循環中活性保持不變。這樣,在適當的緩沖體系中加入模板D N A 。一套寡聚核苷酸片段,耐熱D N A 連接酶,將上述反應體系加熱,使模板D N A 在高溫下(94 ℃)一分鐘變性,解鏈;然后將反應體系降至退火溫度(65 ℃),4 分鐘使模板寡聚核苷酸互補成雙鏈;D N A 連接酶催化兩相鄰的寡核苷酸連接起來。如此循環改變溫度,連接反應重復進行,使目的D N A 得到擴增。如果兩寡核苷酸接頭處存在錯配堿基,則沒有擴增產物的產生,擴增產物可通過聚丙烯酰胺電泳加以鑒定。