LCR ，即在D N A 連接酶的作用下，通過連接與模板D N A互補的兩個相鄰寡核苷酸鏈，快速進行D N A 片段擴增。D N A連接酶可將與模板D N A 鏈互補的兩條毗鄰寡核苷酸片段連接起來，兩條寡核苷酸鏈接頭處存在堿基錯配則阻止連接反應的發生。所以通過連接酶反應，可明確區分寡聚核苷酸是否與模板D N A 完全互補，檢測基因點突變。
耐熱D N A 連接酶在不同溫度組成的循環中活性保持不變。這樣，在適當的緩沖體系中加入模板D N A 。一套寡聚核苷酸片段，耐熱D N A 連接酶，將上述反應體系加熱，使模板D N A 在高溫下（94 ℃）一分鐘變性，解鏈；然后將反應體系降至退火溫度（65 ℃），4 分鐘使模板寡聚核苷酸互補成雙鏈；D N A 連接酶催化兩相鄰的寡核苷酸連接起來。如此循環改變溫度，連接反應重復進行，使目的D N A 得到擴增。如果兩寡核苷酸接頭處存在錯配堿基，則沒有擴增產物的產生，擴增產物可通過聚丙烯酰胺電泳加以鑒定。