試劑、試劑盒 冰醋酸三氟乙酸（TFA)乙腈溶劑 A(0.1%TFA)溶劑 B(80% 乙腈+0.086%TFA)
儀器、耗材 反相高效液相色譜（HPLC) 儀C18 反相 HPLC 柱
實驗步驟
材料與設備
反相高效液相色譜（HPLC) 儀
C18 反相 HPLC 柱（VYDAC?,4.6x250 mm)
冰醋酸
三氟乙酸（TFA)(2% 水溶液儲液
乙腈
溶劑 A(0.1%TFA)(用 0.2-um 的尼龍膜過濾)
溶劑 B(80% 乙腈+0.086%TFA)（用 0.2-um 的尼龍膜過濾)
操作程序
1）用反相 HPLC 分析透析時和透析后所取的樣品（見 P.149)。
2) 各樣品取 100ul，加 5ul 冰醋酸，混勻。
注：若樣品極渾濁或有沉淀，可在進樣前用微型離心機離心。
3)C18 柱經 0.1%TFA/水/乙腈系統平衡后，進 50ul 經乙酸調節過的樣品，215nm 檢測。進樣后，用溶劑 A 洗柱 5 min, 流速 1 ml/min。線性梯度洗脫：10 min 內從 100% 溶劑 A 至 100% 溶劑 B。再用溶劑 B 洗 3 min, 溶劑 A 洗 7 min。
4) 再進一系列稀釋的（0.005~0.075%)N-十二烷基肌氧酸鈉（SKL) 標準品，以 SKL 峰高為濃度的函數作圖。根據樣品的峰髙計算樣品中 SKL 的濃度，并以樣品中的 SKL 濃度為時間的函數作圖。
5) 色譜柱使用后，先用 20 mlMilli-Q 純水器制備的水沖洗，接著用 20 ml20% 甲醇沖洗，室溫保存。
注：用 100 ml 緩沖液 A 和 5 冰醋酸配制一空白樣品，按上述方法分析。這可用來校正從柱上洗脫下來的任何溶劑峰。
結果
典型的反相 HPLC 色譜圖，見圖 3-6。