植物細胞或原生質體線粒體DNA分離（物理法）
實驗開始前，將試劑盒里的凈化液（Reagent C）凍融，然后移出1毫升凈化液（Reagent C）和4毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標記為裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進行下列操作。
準備5 X 107植物細胞或原生質體
移入一個50毫升錐形離心管
放入臺式離心機離心10分鐘，速度為200g
小心抽去上清液
加入5毫升預冷的清理液（Reagent A），混勻細胞
放入臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
小心抽去上清液
加入預冷的5毫升裂解工作液
渦旋震蕩5秒，充分混勻細胞顆粒群
即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化細胞（約80下）（注意：參見注意事項7）
將所有細胞勻漿物移入15毫升錐形離心管，放入4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管（如果上清液含有肉眼可見的殘渣，重復離心5分鐘一次，速度為3000g）——此步驟去除細胞壁、淀粉顆粒、細胞核和未溶解的細胞以及完整質體等殘渣
放入4℃超速離心機離心10分鐘，速度為10000g
小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物（注意：如果暫時停止操作，須暫時放進－70℃冰箱里）
加入300微升破膜液（Reagent F）到線粒體顆粒樣品中
渦旋震蕩15秒，混勻顆粒群
轉入1.5毫升離心管
置入冰槽中孵育15分鐘
加入30微升去干擾液（Reagent G）
用200微升槍頭上下抽吸混勻
放進37℃恒溫水槽孵育15分鐘
加入30微升酶解液（Reagent H）
渦旋震蕩15秒
放進58℃恒溫水槽或干式培養儀孵育2小時
置于室溫下冷卻15分鐘，直至處于室溫狀態（或置于冰槽里15至30秒）
加入300微升萃取液（Reagent I）（注意：使用前搖勻）
渦旋震蕩5秒
放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管（注意：切莫觸碰液相交界面上的白色膜狀物）
加入100微升濃縮液（Reagent J）到新的離心管
加入1微升助沉液（Reagent K）
加入800微升沉淀液（Reagent L）
在渦旋震蕩儀上震蕩5秒，充分混勻
放進微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）（注意：離心前做好方位標記，以便離心后觀察管底沉淀顆粒）
小心抽掉上清液
加入1毫升純化液（Reagent M）
放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉上清液
空氣中晾干沉淀顆粒群
加入20微升緩沖液（Reagent N）
溶解后放進－20℃冰箱長期保存或移出2微升進行PCR反應
植物細胞或原生質體線粒體DNA分離（化學法）
實驗開始前，將試劑盒里的凈化液（Reagent C）凍融，然后移出1毫升凈化液（Reagent C）和4毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標記為裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進行下列操作。
準備5 X 107植物細胞或原生質體
移入一個50毫升錐形離心管
放入臺式離心機離心10分鐘，速度為200g
小心抽去上清液
加入5毫升預冷的清理液（Reagent A），混勻細胞
放入臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
小心抽去上清液
加入預冷的5毫升裂解工作液
渦旋震蕩5秒，充分混勻
（選擇步驟）超聲波處理1分鐘
在冰槽里孵育2分鐘，期間渦旋震蕩5秒一次
加入預冷的500微升強化液（Reagent D）
渦旋震蕩5秒，充分混勻
在冰槽里孵育5分鐘，期間渦旋震蕩5秒二次（注意：參見注意事項8）
加入預冷的5毫升保存液（Reagent E），輕輕搖動試管混勻
放入4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管（如果上清液含有肉眼可見的殘渣，重復離心5分鐘一次，速度為3000g）——此步驟去除細胞壁、淀粉顆粒、細胞核和未溶解的細胞以及完整質體等殘渣
放入4℃超速離心機離心10分鐘，速度為10000g
小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物（注意：如果暫時停止操作，須暫時放進－70℃冰箱里）
加入300微升破膜液（Reagent F）到線粒體顆粒樣品中
渦旋震蕩15秒，混勻顆粒群
轉入1.5毫升離心管
置入冰槽中孵育15分鐘
加入30微升去干擾液（Reagent G）
用200微升槍頭上下抽吸混勻
放進37℃恒溫水槽孵育15分鐘
加入30微升酶解液（Reagent H）
渦旋震蕩15秒
放進58℃恒溫水槽或干式培養儀孵育2小時
置于室溫下冷卻15分鐘，直至處于室溫狀態（或置于冰槽里15至30秒）
加入300微升萃取液（Reagent I）（注意：使用前搖勻）
渦旋震蕩5秒
放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管（注意：切莫觸碰液相交界面上的白色膜狀物）
加入100微升濃縮液（Reagent J）到新的離心管
加入1微升助沉液（Reagent K）
加入800微升沉淀液（Reagent L）
在渦旋震蕩儀上震蕩5秒，充分混勻
放進微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）（注意：離心前做好方位標記，以便離心后觀察管底沉淀顆粒）
小心抽掉上清液
加入1毫升純化液（Reagent M）
放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉上清液
空氣中晾干沉淀顆粒群
加入20微升緩沖液（Reagent N）
溶解后放進－20℃冰箱長期保存或移出2微升進行PCR反應
注意事項
本產品為20次操作（1克植物組織或5 X 107細胞）
線粒體操作均須在4℃或以下狀態下進行
操作時，須無菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent E）
建議使用足夠的組織或細胞量
建議植物組織使用組織勻漿器操作；德國的BRAUN細胞勻漿器最為理想
建議嚴格控制操作時間
通常勻化次數為80下（或細胞顆粒群/組織塊狀消失為止）達到80％的細胞裂解為理想狀態，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度：完整細胞呈現發亮的圓環。低于50％可以增加勻化次數。
通常孵育5分鐘達到80％的細胞裂解為理想狀態，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細胞裂解程度：完整細胞呈現發亮的圓環。低于50％可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數
裂解液（Reagent B）具有吸附去除酚類物質的作用
不同組織，其線粒體含量不同；通常1克植物組織的線粒體含量為10至50微克線粒體蛋白
試劑中的溶液使用前搖勻；酶解液（Reagent H）需放進37℃凍溫育許；為避免反復凍融，建議適量分裝
通常1克植物組織或5 X 107細胞中提取的線粒體DNA達1至10微克
本產品所獲得的線粒體DNA純度和產量最為理想，確保無核DNA和外源性DNA污染
本公司提供系列植物線粒體分析技術產品