(1)原理 膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯(紅色)水解為乙酸與靛酚(藍色),有機磷或氨基甲酸酯類農藥對膽堿酯酶有抑制作用,使催化、水解、變色的過程發生改變,由此可判斷出樣品中是否含有有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在。
(2)試劑
①速測卡:固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片(廣州天河綠洲生物化學研究中心)
②pH7.5緩沖溶液:分別取15.0g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)與1.59g無水磷酸二氫鉀(KH2PO4),用500mL蒸餾水溶解。
(3)儀器 常量天平,有條件時配備37℃±2℃恒溫裝置。
(4)分析步驟
①整體測定法
a.選取有代表性的蔬菜樣品,擦去表面泥土,剪成0.5cm左右見方碎片,取5g放入帶蓋瓶中,加入10mL緩沖溶液,振搖50次,靜置2min以上。
b.取一片速測卡,用白色藥片蘸取提取液,在37℃溫度中放置10min,有條件時在恒溫裝置中放置,預反應后的藥片表面必須保持濕潤。
c.將速測卡對折,用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min,使紅色藥片與白色藥片疊合反應。
d.每批測定應設一個緩沖液的空白對照。
②表面測定法(粗篩法)
a.擦去蔬菜表面泥土,滴2～3滴緩沖溶液在蔬菜表面,用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。
b.取一片速測卡,將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。
c.在37℃溫度中放置10min,有條件時在恒溫裝置中放置,預反應后的藥片表面必須保持濕潤。
d.將速測卡對折,用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min,使紅色藥片與白色藥片疊合反應。
e.每批測定應設一個緩沖液的空白對照。
(5)結果判定 結果以酶被有機磷或氨基甲酸酯類農藥抑制(為陽性)、未抑制(為陰性)表示。
白色藥片不變色及略有淺藍色均為陽性結果,白色藥片變為天藍色為陰性結果。對陽性結果的樣品,可用其他分析方法進一步確定具體農藥品種和含量
(6)速測卡技術指標
①靈敏度指標
②符合率在檢出的30份以上陽性樣品中,經氣相色譜法驗證,陽性結果的符合率應在80%以上。
(7)說明 韭菜、生姜、蔥、蒜、辣椒、胡蘿卜等蔬菜中,含有破壞酶活性或使藍色產物退色的物質,處理這類樣品時,不要剪得太碎浸提時間不要太長,必要時可采取整株蔬菜浸提的方法。