鄰甲酚酞絡合酮比色法測定血清總鈣實驗

血清

AMP 堿性緩沖液

鄰--甲酚酞絡合酮顯色劑

一、 實驗試劑：

l. 鄰--甲酚酞絡合酮顯色劑：稱取8一羥基喹啉500mg，置燒杯中。加濃HCL 15ml，使其溶解并轉人500ml容量瓶中，再加入鄰--甲酚酞絡合酮25mg，待完全溶解后，如Tritonx-10Oml混勻，然后加去離子水至刻度置聚乙烯瓶內保存。

2. lmol/L AMP 堿性緩沖液：稱取a-氨基-2-甲基-l-丙醇89.14g，置1L容量瓶中，加500ml去離子水溶解待完全溶解加至刻度，置聚乙烯瓶中室溫保存。

3. 顯色應用液：應用時，根據當日標本的多少將上述兩液等量混合。

4. 鈣標準液（2.5mmol/L）：準確稱取經110℃干燥12h的碳酸鈣250mg，地置于1L容量瓶內，加稀鹽酸（1份濃HCL加9份去離子水）7ml溶解后，加去離子水900ml，然后用500g/L醋酸銨溶液調PH值至7.0，最后加去離子水至刻度，混勻。

二、實驗操作：

溫勻，放5min后，分光光度計波長575nm，10mm光徑比色杯用空白管調零，讀取各管吸光度。

如標本混濁、黃疸、浴血、需做校正試驗，于空白管及測定管中各加入5g/L EGTA溶液0.05ml再測吸光度，再次讀取的吸光度差，即為校正吸光度。

三、計算：

血清鈣 mmol/L= { [ 測定管吸光度（或校正管吸光度）] / 標準管吸光度 }x2.5

參考值：成人：2.03-2.45 mmol/L

兒童：2.25-2.67 mmol/L

1. 用血清或肝素抗凝血漿標本，不能用鈣螯合劑（EDTANa₂）及草酸鹽作抗凝劑的標本。

2. 鄰--甲酚酞絡合酮試劑靈敏度很高，所用試管和器皿如有微量的污染亦會引起測定誤差，故此，測定最好用一次使用的塑料管，所用進劑應在聚乙烯瓶內保存。如果條件不允許而用玻璃試管和器皿時一定要經稀鹽酸清洗，再用去離子水沖凈后方可使用。

通過對顯色穩定性,線性關系,重復試驗及回收試驗的觀察,以及與其它方法對比,證明本法有靈敏度高,方法簡便,穩定性好的特點,可推廣應用。

本實驗來源于牡丹江醫學院 本科 5 年制檢驗專業實驗指導，《血清鈣鄰甲酚酞絡合酮比色法》。