實驗方法原理 鄰--甲酚酞絡合酮是全屬洛合指示劑,同時也是酸堿指示劑,在堿性溶液中與鈣及鎂螯合,生成紫紅色化合物。做鈣測定時,在試劑中加入8-羥基喹啉以消除標本中鎂離于的干擾。
試劑、試劑盒 AMP 堿性緩沖液
儀器、耗材 鄰--甲酚酞絡合酮顯色劑
實驗步驟
一、 實驗試劑:
l. 鄰--甲酚酞絡合酮顯色劑:稱取8一羥基喹啉500mg,置燒杯中。加濃HCL 15ml,使其溶解并轉人500ml容量瓶中,再加入鄰--甲酚酞絡合酮25mg,待完全溶解后,如Tritonx-10Oml混勻,然后加去離子水至刻度置聚乙烯瓶內保存。
2. lmol/L AMP 堿性緩沖液:稱取a-氨基-2-甲基-l-丙醇89.14g,置1L容量瓶中,加500ml去離子水溶解待完全溶解加至刻度,置聚乙烯瓶中室溫保存。
3. 顯色應用液:應用時,根據當日標本的多少將上述兩液等量混合。
4. 鈣標準液(2.5mmol/L):準確稱取經110℃干燥12h的碳酸鈣250mg,地置于1L容量瓶內,加稀鹽酸(1份濃HCL加9份去離子水)7ml溶解后,加去離子水900ml,然后用500g/L醋酸銨溶液調PH值至7.0,最后加去離子水至刻度,混勻。
二、實驗操作:
溫勻,放5min后,分光光度計波長575nm,10mm光徑比色杯用空白管調零,讀取各管吸光度。
如標本混濁、黃疸、浴血、需做校正試驗,于空白管及測定管中各加入5g/L EGTA溶液0.05ml再測吸光度,再次讀取的吸光度差,即為校正吸光度。
三、計算:
血清鈣 mmol/L= { [ 測定管吸光度(或校正管吸光度)] / 標準管吸光度 }× 2.5
參考值:成人:2.03-2.45 mmol/L
兒童:2.25-2.67 mmol/L
注意事項
1. 用血清或肝素抗凝血漿標本,不能用鈣螯合劑(EDTANa2)及草酸鹽作抗凝劑的標本。
2. 鄰--甲酚酞絡合酮試劑靈敏度很高,所用試管和器皿如有微量的污染亦會引起測定誤差,故此,測定最好用一次使用的塑料管,所用進劑應在聚乙烯瓶內保存。如果條件不允許而用玻璃試管和器皿時一定要經稀鹽酸清洗,再用去離子水沖凈后方可使用。