酵母感受態細胞制備實驗——試劑盒制備法

酵母化學感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理，高效快速制備釀酒酵母化學感受態細胞，用于長期凍存以備后續轉化的產品。

酵母菌

YPD培養基酵母化學感受態細胞制備試劑盒

離心管冰箱冷凍管保溫冰盒

一、挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落（4℃放置不超過3周的也可以），接種到裝在50 mL 離心管中的10 mL的自備的YPD培養基中。

二、30℃搖晃培養，搖床速度250 rpm/分鐘，直到OD₆₀₀達到0.6-1.0（相當于0.6-1x10⁷細胞/mL）。

三、室溫3 000 rpm離心5 min，棄上清得酵母細胞沉淀。

四、新鮮制備適量的酵母感受態制備工作液。對10 mL酵母需要5.25 mL的工作液，其配制方法是：將4.75 mL制備液A、0.25 mL制備液B和0.25 mL制備液C加入到一個無菌的離心管中后充分震蕩混勻即可。酵母感受態制備工作液可放室溫待用。

五、用0.5倍體積的新鮮配制的酵母感受態制備工作液洗滌酵母細胞沉淀一次（對10 mL酵母則需要5 mL酵母感受態制備工作液）。即混合后振蕩1分鐘，室溫3 000 rpm離心3分鐘，去上清得洗滌后的酵母細胞沉淀。

六、再用0.02倍體積的酵母感受態制備工作液充分重懸菌體（對10 mL酵母，則需要0.2 mL酵母感受態制備工作液）。

七、按每管0.2 mL分裝到冷凍管中，放入保溫冰盒中冷卻半小時后再放入-80℃冰箱待用。0.2 mL的感受態細胞足夠1次轉化使用。

放入保溫冰盒的目的是使溫度緩慢下降，急凍將使轉化效率降低，這點跟大腸桿菌感受態制備過程不同。