酵母核糖核酸(RNA)的提取、水解及組成成分的鑒定

原理

核酸在機體生命活動中具有重要意義，核酸可分為核糖核酸和脫氧核糖核酸兩類。酵母中富含的核糖核酸在堿處理下成為可溶性的鈉鹽與蛋白質等其它成分分開，然后用乙醇提取。加酸水解核酸，可鑒定其組成成分。
用硫酸水解RNA時，可以生成磷酸、戊糖和堿基。各種成分以下列反應鑒定：
（1） 磷酸與鉬酸銨試劑作用能產生黃色的磷鉬酸銨沉淀。
（2） 核糖與地衣酚試劑反應呈鮮綠色。
（3） 嘌呤堿與硝酸銀能產生白色的嘌呤銀化物沉淀。
試劑和器材
一、試劑
（1）0.5% NaOH （2）3M 醋酸
（3）8% 硫酸 （4）無水酒精
（5）乙醚 （6）氨水
（7）含2% HCL的95%酒精 （8）濃硝酸
（9）0.1M AgNO3 （10）酵母
（11）石蕊試紙
（12）鉬酸銨試劑：將2克鉬酸銨溶解在100毫升10% 硫酸中。
（13）地衣酚試劑：100毫升濃鹽酸加入100毫克三氯化鐵，搖勻，貯存備用，使用前加入476毫克地衣酚。
 二、器材
（1）試管 （2）電爐
（3）三角燒瓶 （4）研缽
（5）離心機 （6）滴管

操作方法

一、酵母RNA的提取
（1）取酵母3克置于研缽中，加入25毫升0.5%氫氧化鈉溶液研成勻漿。
（2）將勻漿移入三角瓶中，在沸水浴上加熱水30分鐘。
（3）離心沉淀10-15分鐘。
（4）取上清液用3M醋酸4-5滴酸化至蘭色石蕊試紙變紅色
（5）一面攪拌一面加入含2%HCL的95%酒精溶液10毫升。
（6）離心5分鐘，將沉淀用無水乙醇5毫升洗滌一次，離心5分鐘，沉淀再用乙醚3毫升洗滌一次，離心5 分鐘，回收乙醚。
（7）用手心握住離心管并不斷攪拌使乙醚揮發而使RNA迅速干燥。
二、水解RNA
取1/2左右的RNA粉末于試管中加入8%硫酸4毫升在沸水浴上水解5分鐘。
三、組成成分鑒定
（1）嘌呤堿基的檢查
取水解液6滴，于試管中加氨水10滴，再加0.1M硝酸銀溶液6滴，在沸水浴上加熱，觀察變化，何故？
（2）磷酸的檢查
取水解液5滴，于試管中加5滴濃硝酸酸化，再加入5滴鉬酸銨溶液在沸水浴上加熱，冷卻靜止有何現象。
（3）核糖的檢查
取水解液6滴，于試管中加10%氫氧化鈉，使其成堿性，然后加地衣酚3毫升，在沸水浴上加熱，觀察變化，何故？