酵母核糖核酸的分離及組分鑒定

一、目的

　　了解核酸的組分，并掌握鑒定核酸組分的方法。

二、原理

　　酵母核酸中RNA含量較多。RNA可溶于堿性溶液，在 堿提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀， 由此即得到RNA的粗制品。

　　核糖核酸含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸各組分。加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測出上述組分的存在。

三、器材

四、試劑和材料　

　　將2 mL 10％三氯化鐵溶液（用FeCl₃·6H₂O配制）加入 到400 mL濃鹽酸中。

　　9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL

　　溶解6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1個月）。

　　10．定磷試劑 50 mL

　　（1）17％硫酸溶液將17mL濃硫酸（比重1.84）緩緩加入到83 mL水中。

　　（2）2.5％鉬酸銨溶液將2.5g鉬酸銨溶于100 mL水中。

　　（3）10％抗壞血酸溶液10g 抗壞血酸溶于100 mL水中，貯棕色瓶保存。溶液呈淡黃色時可用，如呈深黃或棕色則失效，需純化抗壞血酸。

　　臨用時將上述3種溶液與水按如下比例混合。

　　17％硫酸溶液∶2.5％鉬酸銨溶液∶10％抗壞血酸溶液∶水=1∶1∶1∶2（V／V）。

　　11．酵母粉 200 g

 五、操作
　　將15g酵母懸浮于90 mL 0.04 mol／L氫氧化鈉溶液 中，并在乳缽中研磨均勻。將懸浮液轉移至150毫升錐形瓶 中。在沸水浴上加熱30分鐘后，冷卻。離心（3000 r／min）15分鐘，將上清液緩緩傾入30 mL酸性乙醇溶液中。注意要一邊攪拌一邊緩緩傾入。待核糖核酸沉淀完全后，離心（3000 r／min）3分鐘。棄去清液。用95％乙醇洗滌沉淀兩次，乙醚洗滌沉淀一次后，再用乙醚將沉淀轉移至布氏漏斗中抽濾。沉淀可在空氣中干燥。
　　取200 mg提取的核酸，加入1.5 mol／L硫酸溶液10 mL，在沸水浴中加熱10分鐘制成水解液并進行組分的鑒定。
　　1．嘌呤堿 取水解液1mL加入過量濃氨水，然后加入約1mL0.1mol／L硝酸銀溶液，觀察有無嘌呤堿的銀化合物沉淀。
　　2．核糖 取1支試管加入水解液1mL、三氯化鐵濃鹽 酸溶液2 mL和苔黑酚乙醇溶液0.2mL。放沸水浴中10分鐘。注意溶液是否變成綠色，說明核糖的存在。
　　3．磷酸取 1支試管，加入水解液1mL和定磷試劑1mL。在水浴中加熱，觀察溶液是否變成藍色，說明磷酸是否存在。