酵母菌的培養與分離

實驗概要

學習培養和分離酵母菌的技術和方法。

實驗原理

大多數酵母菌為腐生，其生活最適pH為4.5－6，常見于含糖分較高的環境中，例如果園土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生長迅速，易于分離培養，在液體培養基中，酵母菌比霉菌生長得快。

利用酵母菌喜歡酸性環境的特點，常用酸性液體培養基獲得酵母菌的培養液（這樣做的好處是酸性培養條件則可抑制細菌的生長），然后在固體培養基上用劃線法分離之。

主要試劑

1. 0.1%美藍染液

2.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基：

　　原料：馬鈴薯（200克）、葡萄糖（20克）、瓊脂（15-20克）、蒸餾水（1000ml）。

　　配制方法：
（1）先將馬鈴薯去皮，切片，稱200克并加蒸餾水1000ml，煮沸半小時，用紗布過濾，補足蒸餾水量至1000ml ，制成20%的馬鈴薯汁。

　　
（2）在20%的馬鈴薯汁中加入瓊脂，煮沸溶化，補足水分并在115℃條件下高壓滅菌20分種。

　　
（3）加入葡萄糖，制成培養酵母菌的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。

3、乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液：配方同上，但不加瓊脂而加乳酸，按每1000ml培養液中含5ml乳酸的量加入，并分裝試管。 

主要設備

1ml的無菌吸管

無菌培養皿

實驗步驟

1、接種：取一小塊果皮，不需沖洗，直接接入乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液管中，置28-30℃，培養24小時，可見培養液變混濁。

2、培養，用無菌吸管取上述培養后培養液0.lml，注入另一管乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液中，置28一30℃再培養24小時或稍長(過長則霉菌長出)。

3、觀察：用無菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的0.l%美藍染色液中，混勻后加蓋玻片制成水浸片，先用低倍鏡后換高倍鏡觀察酵母菌的形態和出芽生殖情況。活酵母菌可使美藍還原，從而使菌體不著色，用此方法可判斷酵母菌的死活。

4、分離：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基溶化后制成平板。用劃線法分離酵母菌培養液，從而得到單個菌落。挑取單個菌落反復再次劃線分離純化，最終可獲得純培養。

注意事項

1.配制培養基時，應注意瓊脂的加量，不同規格及批次的瓊脂的加量應由實驗確定，不能照搬書上的加量。

2.對培養基加熱時應注意瓊脂的糊底與暴沸。

3.滅菌鍋操作時，首先應注意水一定要加足夠，排氣要徹底，其次滅菌期間不要離開人，滅菌結束后，關閉電源，拔掉插頭，最后放氣一定要緩慢，均勻，氣放徹底才能開鍋，取鍋內物品，應小心，防止燙傷。

   4.接種前應注意無菌工作臺的消毒與殺菌，接種時應注意手與接種工具的消毒。