15、菌體密度：
菌體是在BMMY中培養的，可以不用BMMY做對照，在600nm處測OD值，培養基和PBS光吸收都很低，PBS更方便。
麥芽浸提液培養酵母（不換液，補料），生長階段結束后，密度可達到10-12，誘導培養結束后，密度可達到18左右。
如果用1體積的BMGY，在生長階段結束后，換液時，加入1/10——1/2體積的BMMY進行誘導培養（即濃縮培養），細胞密度也可達到20以上。
通常，真正的高密度發酵只有在發酵罐里才能實現，OD600可達到40-60及以上。搖瓶很難達到那樣的密度，不過可以采取濃縮培養的方式實現高密度。
搖瓶不能像發酵罐那樣保證通氣量，但可以通過裝量來暫時替代這個指標。
17、菌種保存
用15%甘油做保護劑，-70度長期保存，-20度短期保存使用。不過要注意凍存前一定充分混勻，酵母菌體很容易沉降到EP管底部，保存效果大打折扣。
一般OD2-6的YPD過夜菌吸取300ul菌液到滅菌的ＥＰ管然后加等體積的甘油，混勻，放于－２０度．保存長的話最好放－８０度冰箱。
重組菌株傳代次數太多，確實可能存在菌株退化的現象。這在用動物細胞表達系統如CHO，NS0系統更為明顯，所以一定要保存好最原始的重組菌株，每次從中劃板，挑單克隆表達，盡量減少菌株傳代次數。不行的話再用相同的方法重新轉化篩選高表達菌株。
GS115的鑒定方法
接種GS115于5ml YPD液體培養基，30℃，200rpm振蕩過夜，涂布 YPD平板，30℃培養48 小時，用
YNB基本培養基和含His的補充培養基作點種分離純化，挑選在補充培養基生上生長而在基本培養基上不生長的單菌落劃YPD平板，4℃保存。GS115的
his4基因突變了，不能在組胺酸缺陷型培養基上生長，一般的YPD培養基營養豐富，什么都有了，而YNB卻只含基本氮源，GS115應該在上面不長，就是從YPD上挑菌落，在YNB和補充了HIS的平板上對應的點一下，在HIS上長而YNB上不長的是GS115，這樣能挑到純的，以防突變。
附：TCA沉淀方法；ELISA protocol；原位雙膜法快速檢測陽性表達株：
TCA沉淀方法
培養基上清直接電泳跑出來的條帶經常很難看，可以TCA沉淀濃縮后跑電泳，。表達上清很少有直接考染能看得到條帶的， 1ml表達上清濃縮到20ul直接電泳。一般表達量大于1mg/ml可以看到明顯條帶，但重復性不好。
具體步驟：
1.菌液10000g,離心5分鐘，收集表達上清。
2.取500-1000ul上清于EP管中，加入1/9體積的100％TCA，顛倒10次混勻。
3.樣品置于冰浴中大于0.5小時，過夜效果更好。
4.15000g,離心10－20分鐘,可見有棕黑色沉淀，倒掉上清，將EP管倒扣在吸水紙上輕輕控幾下，除去殘余在管口的液體。
5.將EP管倒置于吸水紙長，37度烘箱10－20分鐘，待管底無明顯液體殘留，如果管壁還殘留有液體，可以吸水紙吸掉。可以改成室溫或用電吹風，關鍵是除去管底和管壁殘余液體。
6.15000g,離心10－20分鐘,用20ul槍頭盡量吸去管底殘余的液體，此步驟要快，不然沉淀容易散開，降低蛋白回收率，一般最多幾ul或者沒有，注意不要吸到沉淀。
7.EP管倒置于吸水紙長，37度烘箱5分鐘，確認管壁和管底沒有液體殘留。
8.加入20－50ul Loading
buffer，95度加熱10nim，一般沉淀會自動溶解，如果不溶，用手指輕彈管壁或用20ul槍頭輕輕吸打，注意整個操作盡量不要碰到管壁，因為管壁可能沾有殘余TCA。如果藍色的Loading
buffer不變成黃色，說明殘余TCA吸棄了干凈，如果變黃，一般不影響電泳。此方法連丙酮洗這一步都省了，而且不影響電泳效果。